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优点
专利配方,大大缩短了转印的时间,同时,又保留了蛋白的完整性,使得蛋白转印过程中不发生降解或者变性。完全转印大约只需要10分钟。
•转印速度快:与传统的转印缓冲液相比,时间自90分钟-4小时缩短到15分钟
•便捷:适用于原有的设备
•绿色经济:ReadyBlotTM只在转印过程中需要,海绵或者转印膜的浸泡,可以使用用过的跑胶缓冲液或者转印缓冲液来完成。除了几片转印用的膜和纸,不需要浪费其他的东西。
•使用简单:只要按照说明书操作即可。
•转膜效率:100%转移分子量6-240KD的蛋白
•通用性:适用于任何的胶,转印系统和膜
使用方法
ReadyBlotTM转印缓冲液是一种专利配方,能够大大缩短转印时间,减少蛋白的降解或者变性。ReadyBlotTM有两种形式,一种是液体形式,一种是已经做好的含有海绵垫的形式。这种缓冲液可以与任何材质的转印膜匹配(PVDF,消化纤维,尼龙膜……)
1.工作液准备
i.用1L量筒量取100ml10×ReadyBlotTM储备液。
ii.加入200ml甲醇或者95%的乙醇
iii.加入700ml去离子水或者蒸馏水,混匀
2.湿转印法准备
i.在缓冲液中浸泡4片厚的转印用纸片和一片转印海绵
ii.如果用PVDF膜,则将其浸泡在甲醇或者乙醇中
iii.将膜转移到快速转移缓冲液中
iv.将胶拆下来,并在蒸馏水中浸泡2分钟
v.准备转印三明治,如右图
打开转印夹子,阴极一面朝向自己
铺上两层转印用纸片(不要产生气泡)
铺上胶,并用缓冲液打湿
铺上转印膜,赶走所有的气泡,并用缓冲液打湿
再加上两层转印用纸片,不要产生气泡
铺上一层打湿的海绵垫,将转印夹子夹好
放入到转印槽
加入转印缓冲液开始转印,请按照生产商推荐条件操作
3.半干转印法准备
i.在缓冲液中浸泡4片厚的转印用纸片和一片转印海绵
在InvitrogenXCellII™BlotModule中是1-4组转印,相应减少海绵的数量
ii.如果用PVDF膜,则将其浸泡在甲醇或者乙醇中
iii.将膜转移到快速转移缓冲液中
iv.将胶拆下来,并在蒸馏水中浸泡2分钟
v.准备转印三明治,如右图
打开转印装置,阴极一面朝向自己
铺上两层浸湿的海绵(不要产生气泡)
铺上两层转印用纸片(不要产生气泡)
铺上胶,并用缓冲液打湿
铺上转印膜,赶走所有的气泡,并用缓冲液打湿
再加上两层转印用纸片,不要产生气泡
铺上两层打湿的海绵垫,不要产生气泡
重复加入转印三明治
将转印装置关好看,所有的海绵压在一起
请按照生产商推荐条件操作
4.电转移条件
我们推荐使用恒定电流
6%-12%的胶最佳条件
*这条件是1mm胶的最佳条件,跟胶的具体组成和厚度有关。调整转印的条件时,根据预染蛋白Marker的条带是否已经完全转移到膜上老调整。
通过加大或者减小电流来调整,而不是调整时间
电流最小转印时间*
330mA
400mA15-20min
10-15min
保存方法及有效期
室温保存5年
转印图
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