- [05-10]北京六一电泳仪使用说明书及注意事项
- [12-07]险峰光学仪器厂(上海小三线单位)教育高清完整正版视频在线观看...
- [06-26]想用目的基因转染哺乳动物,可以做稳定转染吗?具体用什么方法? ...
- [06-25]关于毕赤酵母电转化的问题 生物科学论坛学术科研互动平台
- [07-21]Biorad Gene Pulser Xcell电穿孔系统(中文)
- [11-08]电转染实验时,对于方波形式的脉冲条件是什么?
- [09-23]单相电机电容与转速的关系
- [11-09]二手BTX ECM630,ECM830电穿孔仪电融合仪性能参数,报价/价格,图片中国...
- [07-20]【求助】谁用过六一厂的半干法电转仪 蛋白质和糖学论坛
相关回复
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2017-11-13
我用的是伯乐公司的电转仪。1电转细胞的准备1.1贴壁细胞(1)电转前1-2天,将细胞转移至75cm2细胞培养瓶培养,至转化前使细胞汇合度约50-70%。此时细胞数约为2-10x106,而每次电转需约1-10x105个细胞。(2)12ml PBS缓慢冲洗细胞。(3)吸出PBS,用0.4ml胰蛋白酶消化细胞。(4)加入10ml含血清的培养基,中和胰酶。(5)400x离心5-7min收集细胞。(6)用PBS、Hepes、无血清培养基等重悬细胞,使之密度为1-5x106cell/ml。1.2悬浮细胞基本等同1.1。2电转化(1)设置电转程序,或选择预设程序。(2)将线性化的重组质粒加入电转杯,所需质粒量根据细胞不同而定,一般起始浓度为10-50ug/ml。(3)向电击杯中加入细胞,颠转电击杯使之混匀。细胞浓度和体积的使用建议请参照表一。(4)将电击杯放入电击槽中,脉冲电击一次。(5)脉冲后,将细胞转移至已含0.5ml培养基的孔中(6)轻轻晃动孔板,使细胞均匀分布,培养箱培养。(7)电转24-48小时后,基因瞬时表达。表一电击杯(cm)细胞浓度(cells/ml)细胞体积(µl)电击后生长条件0.21x10610048孔板 0.5 ml 生长培养基0.25x1064006孔板2 ml生长培养基0.42.5x1062006孔板 2 ml生长培养基提高质粒量至20ug以上可是转化效率达到70%以上。展开
- 1084186260北京六一电泳仪使用说明书及注意事项
- 1165489020险峰光学仪器厂(上海小三线单位)教育高清完整正版视频在线观看...
- 1088260980想用目的基因转染哺乳动物,可以做稳定转染吗?具体用什么方法? ...
- 1119706080关于毕赤酵母电转化的问题 生物科学论坛学术科研互动平台
- 1626804001Biorad Gene Pulser Xcell电穿孔系统(中文)
- 1510152206电转染实验时,对于方波形式的脉冲条件是什么?
- 1127406480单相电机电容与转速的关系
- 1510200623二手BTX ECM630,ECM830电穿孔仪电融合仪性能参数,报价/价格,图片中国...
- 1626717602【求助】谁用过六一厂的半干法电转仪 蛋白质和糖学论坛
- 1364791200电转工具价格报价行情
- 1106716740Eppendorf,关于Eppendorf的所有信息 实验室资讯网
- 1510152206有人做过CHO细胞的电击转染实验吗?我做的转染效率太低,求高人指点。最...