摘要：本文主要介绍了大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法.

第一天：1.将适合菌株（如XL1-Blue,DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养

2.高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用

3.准备几瓶灭菌水（总量约1.5升）,保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用

第二天4.转移0.2-1ml过夜培养物至装有500mlLB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升摇瓶

5.37°C下剧烈振荡培养2-6小时

6.定时监控OD600值（培养1小时后每半小时测定一次）

7.当OD600值达到0.5-1.0时,从摇床中取出摇瓶,置于冰上冷却至少15分钟（需要的话这种方式可以存放培养液数小时）

8.细胞在4°C5000g下离心15分钟,弃上清液（如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天）

9.用灭菌的冰水重悬浮细胞.先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中（几毫升）,然后加水稀释至离心管的2/3体积.

10.照上面步骤重复离心,小心弃去上清液

11.照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞

12.离心,弃上清液

13.用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞

14.照上面步骤离心,小心弃去上清液（沉淀可能会很松散）

15.用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2-3ml

16.将细胞按150μl等份装入微量离心管,于-80°C保存

转化方法：1.在冰上解冻电感受态细胞添加1-10μlDNA,冰上培育约5分钟

2.添加1-3μlDNA,冰上培育约5分钟

3.转移DNA/细胞混合物至冷却后的2mm电穿孔容器（无泡）中

4.加载P1000,准备好300μlLB或2xYT

5.对电穿孔容器进行脉冲（200欧姆,25μFd,2.5千伏）（检查时间常数,应该在3以上）

6.立即添加300μl的LB或2xYT至电穿孔容器中

7.37°C下培养细胞40分钟至1小时以复原

8.转移细胞至适当的选择培养基上培养