1.在烧杯中混合以下各成分，制备4%聚丙烯酰胺凝胶（制胶材料：量筒、天平、过滤器（如Sartolab150ml滤器），真空泵、梳子、0.2mm胶隔板、磁力搅拌器、尿素（如Fisher）、丙烯酰胺贮存液（如Bio-Rad40%丙烯酰胺/BIS19：1）、无菌纯水（如FisherAR级水）、混合床基树脂（如Sigma）、过硫酸铵（如Sigma）、10×TBE（如NationalDiagnostics）、TEMED（如Sigma））：

(a)尿素18g；

(b)40%丙烯酰胺贮存液5.2ml；

(c)水27ml；

(d)混合床基树脂0.5g。

2.灌胶。

3.参照技术手册，安装ABI377DNA测序仪，准备跑胶。

4.从热循环仪中取出样品，制备上样混合物（甲醛、葡聚糖蓝色染料（试剂盒提供）、GeneScan500（GS500ROX）内尺寸标准（试剂盒提供）），每管如下：

(a)甲醛1.2μl；

(b)GS500ROX0.13μl；

(c)葡聚糖蓝色上样缓冲液0.2μl。

5.吸1.5μl上样混合物，加入适当的管或板中。同时制备2个等位梯度（试剂盒提供）的上样混合物。向适当的管或板中加入PCR扩增产物或等位梯度，轻轻混合。

6.加热含PCR扩增产物的上样混合物，使DNA变性，95°C约3min，立即移入冰浴中或设定在0°C的电子冰盒中。

7.参照ABI技术手册，完成DNA测序仪的安装，装上凝胶，从单数泳道开始上样。

8.跑胶需2.5h。