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SouthernBlotting:DNATransfer
蚂蚁淘
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SouthernBlotting:DNATransfer
1.DepurinationofDNAfragments:Washgelin0.25MHCl5"(smallgels),7"(largegels)2.Denaturation:Washgelin(0.5MNaOH,1.5MNaCl)for20"(small)to30"(large).3.Neutralization:Washin(0.5MTrispH7.0,3.0MNaCl)for20"(small)to30"(large).4.Cutnylonmembrane(MSI0.45micron#N04HY00010)andseveralpiecesofblotting(e.g.SchleicherandSchuellGB002)papertothesamesizeasthegel.WetthenylonwithdH20,thensoakin5xSSC.5.Assemblesandwich:a.Largesheetofplasticwrapb.Twopiecesblotpaper(precuttosamesizeasgel)soakedin20xSSCc.Gel(wells-sidedown)d.Presoakednylone.Onepieceblotpapersoakedin5xSSCf.10-15piecesofdryblotpaperh.Wrapwholesandwichintheplasticwrapi.Placeglassplateandweightontopandlettransfer>3hr.6.Crosslinkafterblotting.OR1.SetupastandardalkalineSoutherntransferontoanylonmembranewith0.4MNaOH,0.6MNaCl(forpositivelychargedmembranes)or0.25MNaOH,1.5MNaCl(forunchargedmembrane).Transfer>3hours.2.Crosslinkifusinganunchargedmembrane.
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