Materials:

•0.8%agarosegelin1xTAE•DigestedDNA•GlassMilk•NaIsolution•NewWash

Procedure:

1)RundigestedDNAoutonagarosegelslowly(70VonBioRadgel)2)UselongwaveUVlamptovisualizebands.Cutoutbandwithscalpel.CutsmallestpossIBLepiece.3)PutgelsliceinanEppendorftubeandweightofigureoutvolumeofgelslice.(emptytubeapprox.1g).4)Add3volofNaIsolution(gelsliceisusually~200mg,therefore,add600µlNaI).5)Meltgelslicein55¡waterbath.6)Add5µlglassmilkandmix(vortexglassmilkvigorouslytoresUSPendbeforeaddingtoDNAmx).Incubateonice~5min.7)Spindownglassmilkquickly.Decant.Add1mlNewWashandvortex.Doatotalof3washes.8)Spindownhardtopelletglassmilk.Aspirateoffliquidandairdry.9)Resuspendpelletin30-50µlTEpH7.5.Heatat55¡for5min.10)Spindownglassmilkandsavesupernatant.ThisisyourDNA.

NaIsolution

Mix90.8gNaIand1.5gNa2SO3(note:sulfite!)toafinalvolumeof100ml(coverwithfoilwhilestirring,lightsensitive).Filterthrough#1Whatmanpaperadd0.5gNa2SO3.Storeindarkat4¡C.

NewWashfor500ml

•50%EtOH250ml•0.1MNaCl2.92g•10mMTris7.55ml1M•1mMEDTA1ml0.5M

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