Reagents

HorserADIshperoxidaseSodiumperiodate,0.1M,freshlymadeEthyleneglycolSephadexG-25Sodiumacetatebuffer,0.001M,pH4.2IgGCarbonate:BicarbonateBuffer,1.0M,pH9.5Sodiumtetraborate(4mg/ml)freshlymade.PBSProcedure

Dissolve16mgHRPin4mldiH2Oand0.8mlofsodiumperiodate.Stirfor20minutes,RTAdd6dropsethyleneglycolStirfor5minutes,RTFilteroveraG-25Sephadexcolumnequilibratedwith1mMacetatePoolcoloredfractionsanddivideintotwoequalparts.Tothefirstpart,add14mgIgGTothesecondpart,add10mgIgG.Tobothadd1Mcarbonatebuffer,dropwise,toraisethepHto9.0-9.5Stirfor2hoursatroomtemperatureTobothadd0.2mlsodiumtetraborateIncubatefor2hoursat2-8oCDialyzeagainstPBS.SeparateonACA-44column,elutedwithPBSPoolfractionsandadd10mg/mlPBS

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