Protocolisfor150mlofcellculture.

1.Spindowncellsandwash1Xin10mlicecoldPBS.

2.ResUSPendpelletin20mllysisbuffer:50mMTrispH8.01%NP-401mMPMSF1µg/mlleupeptin

3.Transfertooakridgetubesandsonicateatasettingof4for20seconds.

4.SpinlysateinSS-34for20minutesat10,000rpm@4°C.

5.Bindsupernatantto0.5mlNi-NTApre-equilibratedinlysisbuffer.Rockat4°Cfor1hourtoovernight.

6.TransferslurrytoBio-Radeconocolumnandcollectflowthru.

7.Washwith20ml50mMTrispH8.0,500mMNaCl.

8.Washwith20ml50mMTrispH8.0,500mMNaCl,5mMimidazole.

9.Elutewith5ml50mMTrispH8.0,500mMNaCl,0.5Mimidazole.Collect1mlfractions.

10.Igenerallypoolfractions1and2anddialyzeovernightagainst2Lofdesiredbuffer.

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