1)将蛋白A-琼脂糖置于50倍体积的Tris缓冲液中充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5cm玻璃层析柱中，用Tris缓冲液平衡。

10-20mL腹水中的抗体，可用干重大约为3g的蛋白A-琼脂糖纯化。

2)腹水液稀释于3倍体积的Tris缓冲液，以1-5mL/min的速度上样于蛋白A-琼脂糖柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白质都被洗脱，采用A280监测流出液。

3)依次用2-3倍柱床体积的柠檬酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液以及甘氨酸•Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白质，洗脱液直接接入装有中和缓冲液的管中。中和缓冲液的体积应为所收集液体积的1/4。

4)采用ELISA法检测洗脱液的抗原特异性MAb。

5)在超滤器中浓缩所分离的单克隆抗体到1-5mg/mL，所用超滤膜为×M50。将单克隆抗体储存于-20℃。测定A280。以计算抗体浓度，鼠的IgG溶液1mg/mL=1.44吸光度单位。