原代心肌细胞培养及APC模型的制作参照先前报道的方法[2]。即取出生后1－2d乳鼠心尖部组织,胰酶消化,离心后用含20%小牛血清的DMEM培养基制成细胞悬液,过滤,按差速贴壁分离法纯化心肌细胞,以1×105cells/cm2接种于24孔板,每24h更换培养液。贴壁生长2d,于实验前24h更换为无血清DMEM培养基,随机分组,每组双平行孔,重复4次操作。缺氧/复氧(anoxia/reoxygention,A/R)模型的制作:首先将培养基用N2在密闭容器中平衡1h以上制成无氧培养基,将培养孔中含氧培养基吸出后加入无氧培养基,随后将培养板置于含5%CO2-95%N2(V/V)混合气体的密闭容器中(37℃)进行缺氧孵育10h,此为缺氧操作,然后更换为与O2平衡的培养基,放回培养箱,复氧孵育1h。APC模型的制作:预先给予1次2h缺氧孵育,24h后按A/R操作。

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