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【求助】瞬转、稳转? 细胞技术讨论版
qydsmile2021-08-21
可以做了 又不用表达个几十天的.....
GFP稳定转染的细胞做免疫荧光,被固定后到最后荧光显微镜下观察时, G...
寞比sln2021-08-20
之前转染了带GFP的质粒,冻存估计有半年了拿来复苏,想做后续实验,结果稳转的细胞荧光少还很弱,请问怎么办?急急急!.....
稳转细胞株构建/稳定株构建/耐药细胞株_价格厂家供应商_和元...
lifengna2021-08-19
稳转细胞株进行细胞增殖和周期时是否还需要加G418.....
实验Q&A:如何用慢病毒转染构建稳转细胞系
耳语仏2021-08-18
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒。.....
稳定转染细胞系的建立观察生物探索
无聊7Ns2021-08-17
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。.....
禁输大潮又双叒叕来了!21000多家医疗机构全部禁止输液!
安卓20062021-08-17
准备养细胞,原代培养,刚刚取下来的组织块怎么保存吗几小时内用的可以放在冰盒里,一个月左右的可以放在-20度冰箱,更长时间的就要放-80度冰箱了。.....
小白求助:shRNA质粒稳转细胞一般能转几个进去
血魇DUV2021-08-16
两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理.由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.稳定转染的细胞株,就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。.....
细胞培养中出现的小黑点到底是什么那?
RaySunE8YN2021-08-16
实验室培养的原代猪肺微血管内皮细胞出现了图中黑色线状类似虫子一样的东西的污染,培养基无明显浑浊变化,细胞形态也正常,更换培养基后这种情况仍然存在,求大神告知这些小东西到底是什么,是否会对细胞造成影响.....
磷酸钙转染
肥沙褐匀0012021-08-15
转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量,所以会有很多质粒.一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因.标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达.如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了.过表达倒没什么标准,每种蛋白表达量也不一致,选择适合自己的浓度就好. 顺转的话,我们实验室采用lipo2000,具体步骤百度文库有,英文的protocol在lipo2000的说明书上也........
原代细胞分离培养鉴定以及检测等整体课题服务 实验方法
快乐一点点2021-08-15
各位专家们大家好,最近在做一些原代细胞相关实验。细胞是自己分离提取的,老板说直接用就行。我想问问大家一般都会做鉴定吗?如果做鉴定是什么方法?普通的鉴定与检测一般都会做,我想咨询的是大家有没有一整套完整的原代细胞检测及鉴定方案。小小10蚁豆敬上,求大神解答!.....
某基因shRNA感染稳转细胞株过表达该基因的质粒的问题 核酸基因技术...
戴蒙久兆182021-08-14
应该是通过病毒载体质粒上的标记基因比如说荧光的eGFP或者带嘌呤霉素抗性基因的用嘌呤霉素筛选吧!.....
C57BL/6胎鼠大脑皮质神经元体外培养与鉴定
佳佳加2021-08-14
我是用24孔板做的,换液后第二天细胞就成这样了,第一张是孔中间的细胞状态,第二张是孔边缘的细胞状态,中间的细胞状态很差,几乎成活的可能性很小了。同样的操作,为什么会有这样的结果,加液量是1ml/孔,是不是加的液体量太多了,导致孔中间的细胞缺氧?还是其他的什么原因?.....
细胞系与原代细胞ros
农师兄2021-08-13
A、从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞,A错误;B、原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去,细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞能存活传到40~50代,这部分细胞称为细胞株,但遗传物质并没有发生改变,B错误;C、细胞株传到50左右不能再继续传代,部分细胞遗传物质改变,具有癌变细胞的特点,可以在培养条件下无限制的传代下去,这部分细胞称为细胞系,C正确;D、胚胎细胞的分裂能力强,一般增殖50-60次,不能无限繁殖,D错误.故选:C......
转染细胞的稳定筛选方法和实验步骤
面忻2021-08-13
请问细胞转染质粒后想获得稳定细胞系,是先用流式细胞仪筛选后再用抗性培养基筛选吗?一般是转染后多久开始进行筛选.....
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