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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 농도 5~20 U/㎕
□ 형상
| 20 mM | Potassium Phosphate (pH7.2) |
| 50 mM | KCl |
| 0.05 mM | EDTA |
| 5 mM | 2- Mercaptoethanol |
| 0.02% | BSA |
| 50% | Glycerol |
□ 보존 -20℃
□ 첨부 Buffer 조성(10×)
| 350 mM | Tris-HCl (pH8.0) |
| 720 mM | KCl |
| 50 mM | MgCl2 |
| 50 mM | DTT |
| 50 mM | Spermidine |
| 0.1% | BSA(별첨) |
□ 기원
Calf thymus
□ 제품설명
본 효소는 그림 1에 나타낸 4종류의 반응을 촉매하는 효소이다. 송아지 흉선 유래이므로 원핵 생물 유래효소와 성질이 달라, Mg2＋가 존재하지 않아도 활성을 나타낸다. 또 원핵 생물의 DNA Topoisomerase I이 (-)의 supercoil 분자에만 작용하는데 반해 본 효소는 (+), (-)의 supercoil 분자를 풀수 있다(그림 1).
□ 활성의 정의
0.5 ㎍/50 ㎕의 supercoiled pBR322 DNA를 37℃에서 30분 동안 100% relaxed form으로 전환시키는 효소활성을 1 U으로
한다.
□ 활성 측정용 반응액 조성
| 35 mM | Tris-HCl(pH8.0) |
| 72 mM | KCl |
| 5 mM | MgCl2 |
| 5 mM | DTT |
| 5 mM | Spermidine |
| 0.01% | BSA |
| 0.5 ㎍/50 ㎕ | Supercoiled pBR322 DNA |
□ 순도
24 U의 본 효소와 0.5 ㎍의 supercoiled pBR322 DNA를 37℃, 24시간 반응하여도 DNA의 EtBr 존재하에서 전기영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
□ 용도
- DNA conformation의 변환과 해석
□ 사용상의 주의
- 첨부반응액에는 spermidine (최종농도 5 mM)이 첨가되어 있다. Spermidine을 첨가하지 않는 경우 활성이 1/20정도로 저하하는
수가 있다. Spermidine을 첨가할 때는 HCI로 pH8.0로 조정하여 사용할 것.- pBR322 DNA와 фX174 DNA의 RF I (supercoil 분자)을 DNA Topoisomerase I으로 반응한 후, 전기영동하면 gel중에 EtBr이 포함되어 있는 경우 밴드의 위치에 변화가 일어나지 않는다.이것은 DNA Topoisomerase I에 의해 relaxed form으로 변환한 DNA가 EtBr의 영향으로 다시 supercoil 상태로 변해버리기 때문이다.따라서 DNA Topoisomerase I활성을 측정할 때는 EtBr이 포함되지 않은 아가로스 겔에서 전기영동을 실시한 다음 EtBr로 염색할 필요가 있다.- 10× 첨부 버퍼에 0.1% BSA를 직접 첨가하면 다량의 백색 침전이 생기므로 반응액을 조제할 때는 다음의 순서로 한다. dH2O → 10× 첨부 버퍼 → 0.1% BSA → 기질 DNA- 본 효소는 유리나 플라스틱에 대하여 흡착성이 크므로 반응할 때는 BSA(Bovine Serum Albumin)을 첨가하는 것이 바람직하다.
