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question 【求助】4080叮当求炎性小体的Western成功经验
本人最近做大鼠 肝脏组织的 NLRP3/NALP3,用的是 santa cruz的一抗；
内参和其他蛋白（一抗是CST的）都做得很好！但是这个NALP3一直没做出来！各种浓度和条件均试过，做过10次了，都是杂带！没有目的条带！

请做出来过这个蛋白的战友过来分享一下你做的具体条件和经验？谢谢大家！！

还可以继续追加叮当的
drguojh 2012-04-29
  • 1. 再好好看一下你的抗体说明书，有些一抗是有WB和组化用的区别的，虽然一般情况下两者都是可以通用的，但是以防万一你的这个比较特殊，建议你好好将抗体说明书重新读一读；2. 检查抗体的使用时是否严格操作，包括抗体稀释液什么的，尤其是稀释液的PH，以及推荐的稀释度、孵育时间和孵育温度等等；还要注意一下一抗、二抗是否相配；以上两个只是回顾或者再审视，如果两者都没有问题，建议你做如下的一点小工作：3. 把你的蛋白取1ul或者2ul直接点在NC膜上，做点杂交实验，一抗、二抗可以按照不同的浓度，注意用一个原浓度的，尤其是一抗的；如果这样有结果，那就是转膜的问题了；如果这个还是不可以，那就换一抗吧……
  • 虽然你没图，但我想多半是一抗不work，换抗体吧。 Santa的抗体做成这样，不奇怪。
answer全部回答 （共 3 条）
  • 又是satan的抗体啊！这种抗体是国产抗体里面最差劲的抗体
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NBP2-34864-500ug Pr9 Novus/Recombinant Human FGF-4 Protein/500ug/NBP2-34864-500ug
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