2010-03-22【求助】DNA酶切、连接的困惑

各位大侠小弟有一事很是郁闷，请各位赐教！
我做的双酶切反应，酶分别是宝生物的BamHI和XhoI，双酶切体系是：载体及目的片段分别是30ul，通用buffer4ul，XhoI、BamHI各2ul，无核酶水2ul，总体积40ul。载体和目的片段都是经37度酶切6h。载体上面这两个酶切位点的距离是6个碱基，目的片段是由pcr反应获得的，从puc19中p出来的，两端带有这两种酶的酶切位点，酶切完成后，做连接反应，体系如下：目的片段（全长1441bp）4ul，无核酶水3ul，10*T4DNA连接酶缓冲液1ul，载体1ul，T4DNA连接酶1ul，总体积10ul。16度过夜。之后摇菌送沉菌测序结果回来，送了5管一个都不对。重复实验两次还是不对！
之后改为先用BanHI单切载体，体系如下：载体17ul，酶1ul，buffer2ul，总体积20ul，30度切6小时后，Promega纯化试剂盒直接纯化，完了之后再用XhoI，37度酶切6小时，体系如上，再次用promega纯化试剂盒纯化，目的片段用双酶切体系酶切，之后做连接反应，之后铺板，挑取菌落共10个，摇菌13小时，取菌液做pcr鉴定，结果10个菌落全是引物2聚体，跑出来的条带都是100bp左右。
各位老师这是怎么回事呢？为什么连接不上呢？小弟先谢过各位大哥了！