1.把石蜡包埋组织切成40~50μm厚的组织片3~5片，或用乳钵研成0.5mm直径大小颗粒状，放入10ml的试管中。

2.加入二甲苯5~8ml时，在室温下脱蜡1~2d，视石蜡脱净与否，更换1~2次二甲苯，石蜡脱净后，弃去二甲苯。

3.水化：依次加入100%、95%、70%、50%梯度乙醇5ml，每步为10min，去乙醇，加入蒸馏水3~5ml，10min后弃之。

4.消化：加入2ml0.5%胰蛋白酶(pH1.5~2.0)消化液，置37℃恒温水浴中消化30min，在消化期间，每隔10min用振荡器振荡1次。

5.消化30min后，立即加生理盐水终止消化。

6.经300目尼龙网过滤，未消化好的组织可做第2次消化。

7.收集细胞悬液，离心沉淀1500r/min，再以生理盐水漂洗1~2次，离心沉淀500~800r/min，去碎片。

8.保存细胞备用。