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实验方法原理 | DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解,产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊醛,后者与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物,其反应为: ![]() 蓝色化合物在595nm处有最大吸收峰,且DNA在40~400μg范围内时,光密度与DNA浓度呈正比。在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度。 |
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实验材料 | 蛋白质 |
试剂、试剂盒 | 小牛胸腺DNANaOH二苯胺纯冰醋酸过氯酸乙醛 |
仪器、耗材 | 试管吸量管容量瓶722分光光度计 |
实验步骤 | 1. 标准曲线的绘制:取干燥试管6支,编号,按下表加入试剂。 ![]() 加完后混匀,于60℃恒温水浴中保温1h,冷却后于595nm处比色测定,以零号管调零点。以DNA浓度为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线。 2. 样品测定:取试管3支,两支为样品管,一支为对照管。对照管操作与标准曲线零号管相同。向每支样品管加2.0ml样品液及4.0ml二苯胺试剂,60℃保温1h,冷却后于595nm处比色测定,以对照管调零点。根据测得的光密度值从标准曲线上查出相应光密度的DNA含量,按下式计算DNA百分含量。 ![]() |