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BCA蛋白定量试剂盒产品介绍
BCA(bicinchoninicacid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知,二价铜离子在碱性的条件下,可以被蛋白质还原成一价铜离子(biuretreaction),一价铜离子和独特的BCASolutionA(含有BCA)相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性,吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
BCA蛋白定量试剂盒产品特点
1.步骤简单,45分钟内完成测定,比经典Lowry法快4倍而且更加方便。
2.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。
3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的TritonX-100,5%的Tween20,
60,80。
4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
产品储存
本产品收到后按照上面指示温度存放各成份,至少一年内有效。蛋白标准长期保存-20℃放置,常温运输。
BCA蛋白定量试剂盒注意事项
1.蛋白标准请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准
曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。
2.SolutionA和SolutionB混合成工作液时可能会有浑浊,但充分振荡混匀后就会消失,成为淡绿色的透明溶液。
3.需酶标仪一台,测定波长为540-590nm之间,562nm最佳;需96孔板。如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但是测定蛋白浓
度时,需根据测定吸光度的杯子的体积,按比例调整A液,B液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品
数量可能会显著减少。
4.BCA蛋白定量试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保无EGTA,EDTA低于10mM,二硫苏糖醇低于1mM,β-巯基乙醇低于1mM。不适
用BCA法时建议使用Bradford法蛋白定量试剂盒。还可以考虑用超纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消
除干扰物质的影响。
5.为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热,但是切勿过热。
6.如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景,请试用Bradford法蛋白定量试剂盒。
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