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微生物染色液配制及染色法资讯
2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝 0.3g95%乙醇 30mL0.01%氢氧化钾溶液 100mL将美蓝溶解于乙醇中,然后与氢氧化钾溶液混合。2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定,待冷。滴加染液,染1~3min,水洗,待干,镜检。2.1.3 结果菌体呈蓝色。
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2.3 耐酸性染色法(萎-倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红 0.3g95%乙醇 10mL5%酚水溶液 90mL将品红溶解于乙醇中,然后与酚溶液混合。2.3.2 3%盐酸-乙醇浓盐酸 3mL95%乙醇 97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定,滴加石炭酸品红染色液,徐徐加热至有蒸气出现,但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时,应随时添加。染5min,倾去染液,水洗。2.3.4.2 滴加盐酸-乙醇脱色,直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定,一般为1~3min),水洗。2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液,复染30s~1min,水洗,待干,镜检。2.3.5 结果:耐酸性细菌呈红色,其他细菌、细胞等物质呈蓝色。 2.4 柯氏染色法2.4.1 染色液2.4.1.1 0.5%沙黄液。2.4.1.2 0.5%孔雀绿液。2.4.2 染色法2.4.2.1 将涂片在火焰上固定,滴加0.5%沙黄液,并加热至出现气泡,约2~3min,水洗。2.4.2.2 滴加0.5%孔雀绿液,复染40~50s。水洗,待干,镜检。2.4.3 结果布氏杆菌呈红色,其他细菌及细胞呈绿色。 2.5 奥尔特氏荚膜染色法2.5.1 染色液沙黄 3g蒸馏水 100mL用乳钵研磨溶解。2.5.2 染色法将涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加热至产生蒸气后,继续染3min。水洗,待干,镜检。2.5.3 结果炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色,荚膜呈黄色。 2.6 瑞氏染色法2.6.1 染色液瑞氏色素 0.1g甲醇 60mL用乳钵研磨溶解。2.6.2 染色法2.6.2.1 涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1min。2.6.2.2 加入等量蒸馏水(pH6.5),染色3~5min。2.6.2.3 用蒸馏水冲洗,待干,镜检。2.7 鞭毛染色法2.7.1 染色液的配制2.7.1.1 甲液:称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g,溶于100mL蒸馏水中,待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。2.7.1.2 乙液:称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液,到出现沉淀后,再滴加使其变为澄清,然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中,至出现轻微雾状为止(此为关键性操作,应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时,要边滴边充分摇荡,染液当天配,当天使用,2~3d基本无效。2.7.2 染色法在风干的载玻片上滴加甲液,4~6min后,用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液,缓缓加热至冒汽,维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色,停止加热,用水冲净,干后镜检,菌体及鞭毛为深褐色到黑色。2.8 碱性复红染色法将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中,然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时,可用滤纸过滤,或静置后取上清液备用。注:本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色,藉以与蜡样芽胞杆菌相区别 |
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