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各位同胞好，最近做免疫组化买了中杉的“FITC标记山羊抗小鼠IgG”二抗，说明书看的糊涂，做了一次组化，浓度是1：100，PBS稀释，时间25分，可是结果是阴性，什么都没有，突然觉得这个荧光素标记二抗是不是不能用DAB显色啊
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回复：时间：2021-08-20
snowmaia各位同胞好，最近做免疫组化买了中杉的“FITC标记山羊抗小鼠IgG”二抗，说明书看的糊涂，做了一次组化，浓度是1：100，PBS稀释，时间25分，可是结果是阴性，什么都没有，突然觉得这个荧光素标记二抗是不是不能用DAB显色啊你的问题有点与你标题不一致，且信息提供不够，目前分析如下：1、荧光素标记二抗孵育后，用PBS浸洗后直接封片，即可在荧光显微镜下观察结果。2、而DAB显色是酶免疫组化中的步骤，需要与过氧化物酶POD及过氧化氢一起进行反应，其中过氧化物酶一般是标记在二抗或三抗上的，而二抗与一抗进行反应——一抗与组织中抗原进行反应。3、排除以上原因后，可能考虑一抗和二抗最佳稀释度的摸索和孵育时间的调整。
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