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2.引物长度一般在15~30碱基之间。
3.引物GC含量在40%~60%之间,Tm值最好接近
4.引物3′端要避开密码子的第3位。
5.引物3′端不能选择A,最好选择T。
6.碱基要随机分布。
7.引物自身及引物之间不应存在互补序列。
8.引物5′端和中间△G值应该相对较高,而3′端△G值较低。
9.引物的5′端可以修饰,而3′端不可修饰。
10.扩增产物的单链不能形成二级结构。
11.引物应具有特异性。
引物设计原则
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