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转染技术新宠-阳离子聚合物基因转染技术
适用宿主广泛,操作简便,细胞毒性小,转染率高。其中聚乙烯亚胺(PEI)的转染性能最好。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔两个碳原子,就是第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何PH下都能充当有效的“质子海绵”体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞,其效果好于脂质聚酰胺,而且细胞毒性低。大量实验证明,PEI是非常有希望的基因治疗载体。目前在设计更复杂的基因载体时,PEI经常做为核心组成成分。
线性聚乙烯亚胺(LinePEI)转染复合物的细胞毒性低,有利于细胞定位,而且转染率极高。
Polyscience公司的两款明星产品线性聚乙烯亚胺(23966-1和24765-1)近年来越来越多的受到研究者们的青睐。其产品被运用到大量的转染实验中,也出现在大量的文献中。
Polyscience公司成立于1961年,总部位于宾夕法尼亚州沃灵顿,是一家生产研发化学产品的公司。该公司的产品种类已经累计超过3000种,其产品的特点是体积小,附加值高。
公司产品主要包含:
1、 单体和聚合物
2、 微球和粒子(有机、无机、可生物降解、磁珠、荧光素、染料、特异性抗体和蛋白包被颗粒,直径从40nm到10mm)用于核酸提取、蛋白分离和纯化等。
3、 高性能粘合剂、涂料和密封剂
23966-1
Polyethylenimine,Linear,MW25000
TransfectionGrade(PEI25K)
24765-1(更高效的PEI聚乙烯亚胺聚合物转染试剂)
PEIMAX-TransfectionGradeLinearPolyethylenimineHydrochloride
(MW40000)
PolyethylenimineHClMAX,Linear,Mw40000(PEI40000)是热卖产品线性化聚乙烯亚胺PEI25000的升级产品,不同之处在于1)完全水解(去乙酰化);2)PEI25000的盐酸盐形式,具更高的水溶特性;3)含更长连续性乙烯亚胺(ethyleneimine)片段,其质子化氮水平比PEI25000提高11%以上。本品经碱中和后,可转化为线性化自由胺(PEI),此时分子量正相当于25000。
ThomasM,etal(2005)研究数据表明,去乙酰化的PEI40000(PolyethylenimineMAX40000)体外质粒DNA转染效率提高21倍,小鼠体内靶向效率达到10,000倍,随之肺部特异疗效显示增强1500倍。
使用方法(仅供参考)
1. Pour~450mLofMilli-QH2Ointoa500-mLglassbeaker.
2. Add500mgofPEItothebeakerwithstirring.
3. AddconcentratedHCldrop-wisetothesolutiontopH<2.0.
4. StiruntilthePEIisdissolved(~2-3h).MaintainthepH<2.0throughout.
Approximately800μLof12MHClwillberequiredforfullPEIdissolution.Theremaystillbesomesmallfiberparticlesthatwillnotdissolve.
5. AddconcentratedNaOHdrop-wisetothesolutiontopH7.0.
Approximately500μLof10MNaOHwillberequiredtoneutralizethePEIsolution.
6. Pourthesolutionintoa500-mLglasscylinder.Adjustthefinalvolumeto500mLwithMilli-QH2O.
7. Filter-sterilizethesolutionthrougha0.22-μmmembrane.
8. Storealiquotsofthedesiredvolumeat-20°C.
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