一、技术原理     TALEN(TranscriptionActivator-LikeEffectorNuclease)技术是基于对DNA识别域(TALEN结合臂)和人工改造的核酸内切酶的切割域(FokⅠ)的结合对细胞基因组进行修饰而实现的。TALEN的DNA识别域是由一些非常保守的重复氨基酸序列模块组成，每个模块由34个氨基酸组成，其中第12和13位的氨基酸种类为可变的（RVDs），且决定了该模块识别靶向位点的特异性。通过DNA识别域结合到靶位点上，以及FokI的切割域形成二聚体后，可特异性对目标基因DNA实现切断，在非同源末端连接修复过程中，DNA双链断开后会由于碱基的随机增减造成目标基因功能缺失。该技术目前已成功应用于植物、细胞、酵母、斑马鱼及大、小鼠等各类模式动物的研究领域。 二、技术特点：     1、可以应用于大小鼠；无动物品系限制，永久失活；    2、成功率可达90%以上；    3、实验周期短、价格低。 三、制备流程及服务周期     设计、构建Talen质粒（2周）→TALEN质粒体外转录成mRAN（1周）→mRAN原核显微注射(F0代鼠生产)（4周）→F1代鼠生产（12周）四、服务承诺     赛业生物科技承诺提供4只F1代大鼠。五、TALEN 技术流程图       TALEN由四部分组成：N端序列，RVD，C端序列，FokI。利用TypeII限制性内切酶可以将RVDs模块分别生成不同的粘性末端，同时又不留有酶切位点，通过一系列的相应酶切连接反应实现RVDs与TALEN骨架的无缝连接。     TALEN系统利用FokI的内切酶活性打断目标基因。FokI形成二聚体发挥活性，在TALEN结合臂的引导下，发挥特异性内切酶活性，在两个靶位点之间剪切DNA，形成DSB（Double-Strand Breaks）,诱发DNA损伤修复机制。细胞通过NHEJ（Non-homologousEnd Joining）修复DNA，在此修饰过程中导致删除或插入了一定数目（非3的倍数）的碱基，造成移码，形成对目标基因特异性KO的突变体。  六、Cygen 利用TALEN技术成功构建 IgMKORat 案例：

SDRatIgMKnockout(TALEN)

TTCCTGCCCAGCTCCATttccttctcctggaact ACCAGAACAACACTGA ATAL1RVDs：NGHDHDNGNNHDHDHDNINNHDNGHDHDNING TAL2RVDs：NGHDNINNNGNNNGNGNNNGNGHDNGNNNNNG 

结果：Sequencingconfirmationofdisruptionof theRatIgMbyTALEN

突变型1、突变型2、野生型结果说明： 突变型1:缺失12bp；突变型2:缺失5bp。