IsolationofDNAfromMouseTailBiopsies

1.Obtaintailbiopsiesfrom2to3weekoldmice:Holdmousefirmlyatbaseoftailwithonehand,withtheothercutoff0.5to1.0cmofthetailtipwithascalpelorsingleedgerazorblade.

2.Add600microlitersofTNESand35microlitersProteinaseK(10mg/ml).

3.Incubateovernight(8-24hr)at55degreesC.

4.Add166.7microliters6MNaCl.Shakevigorouslyfor15sec.

5.Microfuge(12,000-14,000xg)for5minatroomtemp.

6.Removesupernatanttonewtubeandadd1volumecold95%ethanol(EtOH).

7.SpoolprecipitatedDNAwithclosedendcapillarytube.

8.RinseDNApelletwith70%EtOH(dippinginatubefilledwith70%EtOHworkswell)andallowtoairdry5-10min.

9.ResUSPendin100-500microlitersofTE(10mMTris,pH8.0,1mMEDTA).Volumedependsempiricallyonpelletsize.

10.Heatat65degreesCfor10minutestoaiddissolutionofDNA.

11.QuantitateDNAandstoreat4degreesCuntilneeded.

TNES10mMTris,pH7.5400mMNaCl100mMEDTA0.6%SDS

"6M"NaClSaturatedsaltsolutionstoredat37°C

MillerSA.DykesDD.PoleskyHF.1988.AsimplesaltingoutprocedureforextractingDNAfromhumannucleatedcells.NucleicAcidsResearch.16(3):1215.

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