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IsolationofDNAfromMouseTailBiopsies
1.Obtaintailbiopsiesfrom2to3weekoldmice:Holdmousefirmlyatbaseoftailwithonehand,withtheothercutoff0.5to1.0cmofthetailtipwithascalpelorsingleedgerazorblade.
2.Add600microlitersofTNESand35microlitersProteinaseK(10mg/ml).
3.Incubateovernight(8-24hr)at55degreesC.
4.Add166.7microliters6MNaCl.Shakevigorouslyfor15sec.
5.Microfuge(12,000-14,000xg)for5minatroomtemp.
6.Removesupernatanttonewtubeandadd1volumecold95%ethanol(EtOH).
7.SpoolprecipitatedDNAwithclosedendcapillarytube.
8.RinseDNApelletwith70%EtOH(dippinginatubefilledwith70%EtOHworkswell)andallowtoairdry5-10min.
9.ResUSPendin100-500microlitersofTE(10mMTris,pH8.0,1mMEDTA).Volumedependsempiricallyonpelletsize.
10.Heatat65degreesCfor10minutestoaiddissolutionofDNA.
11.QuantitateDNAandstoreat4degreesCuntilneeded.
- TNES10mMTris,pH7.5400mMNaCl100mMEDTA0.6%SDS
"6M"NaClSaturatedsaltsolutionstoredat37°C
MillerSA.DykesDD.PoleskyHF.1988.AsimplesaltingoutprocedureforextractingDNAfromhumannucleatedcells.NucleicAcidsResearch.16(3):1215.
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