LinkerLigation(withT4DNALigase)

1. Inamicrocentrifugetubeprepareasolutionofbluntended,dephosphorylatedDNA(100-500ng)inTEbuffer(5-7µl).
2. Add1-2µgofphosphorylatedlinkersin5µlofTEbuffer.
3. Add:
   • 10Xligationbuffer2µl,
   • 50%PEG4000solution2µl,
   • deionizedwaterto20µl,
   • T4DNALigase2u.Vortexthetubeandspindowninamicrocentrifugefor3-5seconds.
4. Incubatethemixturefor1hourat22°C.
5. InactivateT4DNALigasebyheatingthereactionmixtureat65°Cfor10minutes.Theresultingligationproductscanbedigesteddirectlywithrestrictionendonucleases.

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