一、乙醛玻片的制备

乙醛玻片是一种表面镀有乙醛功能基团的玻璃质的玻片（见图10.7)。可以从销售商处购买到这种产品，如附属于以生产乙醛制品SuperAldehydeSubstrates(商品名）闻名的机构TeleChemInternation，Inc.(Sunnyvale，California)，也可以用下述的方法制备出效果更好的玻片。

1.室温条件下将洁净的纯玻璃片在0.lg/ml的氢氧化钠水溶液中浸泡12h。

实验提示：若需要处理的玻片数目超过30片，可使用一个能搁置30块玻片的不锈钢样片架和玻璃矩形染碟，这样能使操作更方便。

2.用蒸馏水冲洗玻片后，用1%的盐酸（体积分数）再冲洗一次，最后用蒸馏水冲洗两遍。

3.将装有玻片的样片架，放人配有吊桶式转子和微量板支架的离心机中，旋转甩干。离心条件为室温下200g30s。

用离心机甩干玻片，以避免玻片上产生水溃。

4.将95%的乙醇和5%的水混合后，用乙酸调pH至4.5~5.5(约0.1%的乙酸）。

5.边搅拌边加人3-三乙氧基甲硅烷正丁醛，生成2%的硅烷溶液（体积分数）。

6.在室温下，搅拌3min，使其充分水解，并形成硅烷醇，将玻片浸入溶液中，室温条件下再孵育3min。

7.用无水乙醇稍稍将玻片冲洗一下，而后离心甩干。110°C真空干燥IOmin或室温干燥24h。

8.用95%的乙醇和5%的水的混合溶液冲洗玻片三次，每次5min，而后离心甩干。将玻片在室温条件下，保存于真空干燥器或惰性气体中。

二、BSA-NHS玻片

BSA-NHS玻片是在显微镜玻璃载片的表面，共价粘连一层小牛血清白蛋白(BSA)的玻片。另外，这些BSA分子还可以和玻片表面的蛋白质分子发生共价交联反应（见图10.8)。BSA-NHS玻片是由乙醛玻片制备成的。这种玻片可以从多个销售商那里购买到（包括Sigma-Aldrich、Coming和TeleChemInternational)，也可以直接用玻片来制备。若使用的是购买来的经乙醛处理过的片子，可直接到第⑤步。

1.用上述①~③步的方法清洗玻片。

2.在95%的乙醇和5%.的水的混合液中，搅拌加人3-三乙氧基甲硅烷正丁醛，以形成3%的硅烷溶液（体积分数）（注意：不要加人乙酸）。在室温下搅拌溶液10min，以保证水解充分及形成硅烷醇，然后将玻片浸入溶液中，在室温下继续孵育IOmin。

3.用无水乙醇将玻片稍稍冲洗后，在离心机中甩干。110℃真空干燥10min或室温下干燥24h。

4.用95%的乙醇和5%的水的混合溶液冲洗玻片三次，每次5min，离心甩干。

将玻片在室温条件下保存（最好保存在干燥器中）。

5.将10.24gN，N’-二琥珀酰亚胺碳酸盐和6.96mlN，N’-二异丙基乙胺溶于400ml的乙醛DMF。

N，N’-二琥珀酰亚胺碳酸盐和N，N’-二异丙基乙胺的终浓度为100mmol/L。

6.将30个经乙醛处理过的玻片（从第④步或从商家购买的），于室温下在二琥珀酰亚胺碳酸盐或二异丙基乙胺溶液中，浸泡3h。

在3h的孵育过程中溶液颜色会变黄。

7.用95%的乙醇和5%的水的混合溶液冲洗玻片2次。

8.将玻片在室温条件下，于400ml含有1%BSA的PBS(pH7.5)缓冲液中，浸泡12h。

9.用蒸馏水冲洗玻片2次，用95%的乙醇和5%的水的混合溶液冲洗，再用离心机甩干。

10.将10.24g100mmol/L的N，N’-二琥珀酰亚胺碳酸盐和6.96ml100mmol/L的二异丙基乙胺溶于400ml的乙醛DMF。将玻片在室温条件下，在溶液中浸泡3h。

11.用95%的乙醇和5%的水的混合溶液冲洗玻片，用离心机甩干。

将制备好的玻片于真空干燥器中室温保存，其活力可保持3个月以上。