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| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | DMEM-10乙醇 |
| 仪器、耗材 | 离心机培养瓶转子 |
| 实验步骤 | 1. 重复基本方案1步骤1，按1：10分传到终体积100ml的完全DMEM-10/HEPES中。 2. 准备传代细胞时，应将175cm2培养瓶中的内容物（100ml）转移到—个850cm2旋转培养瓶中，另加150ml完全DMEM-10/HEPES，盖紧瓶盖，置于转瓶培养装置上于37℃培养1~2天。 3. 用饱蘸70%乙醇无菌海绵擦拭旋转培养瓶的瓶盖和瓶颈，打开瓶盖，加250ml完全DMEM-10/HEPES，盖紧瓶盖，再在转瓶装置上培养1~2天。 4. 如步骤3所述擦拭瓶盖及瓶颈。打开转瓶，加大约2L的完全DMEM-10/HEPES，加至几乎满瓶（根据转瓶容量计，总体枳大约2.5L），盖紧瓶盖，并置转瓶培养装瓶上，37℃培养直至培养液变黄色（大约5天）。 5. 将培养液倒入无菌的250ml的锥形离心管中，室温下250g离心20min，收集上清，弃沉淀，将上清分装成数管冻存。 |