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RNA干扰技术基本原理与应用
蚂蚁淘
/发布时间:1533505720 /浏览量:268
| 实验方法原理 | 此染色法为Feulgen早在1924年提出的一种鉴别细胞中DNA的组织化学方法。细胞中的DNA在60℃用1NHCl酸解离脱氧核糖核酸，使嘌呤碱基与糖苷犍破坏，嘌呤碱脱掉，脱氧核糖的中的醛基游离；醛基能与Schiff试剂相结合，形成一种紫色的复合物。 本方法中酸的离解根重要，若温度过低、或酸度不够，醛基暴露不充分，染色会过浅；反之，酸解过分，能导致DNA完全解聚，而染色体的染色反应减弱。细胞中RNA对酸比较稳定，醛基难游离，不被着色，为DNA特异性染色的原因。 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 试剂、试剂盒 | HClSchiff亚硫酸钠品红 仪器、耗材 | 棕色瓶
实验步骤 | 1. 单层盖片法培养细胞，Carnoy或醋酸/甲醇固定20分钟； 2. 投入1NHCl1~2分钟（室温）； 3. 投入1NHCl8~10分钟（60℃）； 4. 投入Schiff剂中染色1~5小时（10℃暗处）； 5. 漂洗液洗2次，每次2分钟； 6. 蒸馏水漂洗2次，每次3分钟； 7. 脱水 75%→100%酒精； 8. 透明 二甲苯2次，每次3分钟； 9. 封片 把盖片置于载物片上（细胞面向上），滴树胶少许，再加较大盖片覆盖； 10. 盖片上加微型重物加压，置数日，树胶干后观察。 镜下观察可见，细胞核染成粉红色至紫红色，胞质无色（为观察DNA，胞质可不必复染）。
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