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Lonza中国代理商Lonza产品介绍 上海华雅思创生物科技有限公司
1)取30ml蓝藻溶液于10000rpm离心15分钟,将沉淀小心转至1.5mlEppendorf管中;2)用1mlTE(PH8.0)洗沉淀,12000rpm离心10分钟,弃上清;加240μLBufferA和60μL的5MNaCl,每管加Sarkosyl(原浓度是10%)至终浓度为0.1%。3)于4℃保温1小时;12000rpm离心2分钟,取沉淀。以500μL溶液(由49.99mlBufferA和10μL1mMNacl组成)洗2次,重悬细胞于250μL溶液(BufferA+25%蔗糖),室温放置1小时;5)加50mg/ml溶菌酶至其终浓度为10~20mg/ml。于30℃放置15~30分钟;加500μLBufferB(由10mMTriscl和50mMNa2EDTA组成),37℃,放置30分钟;6)加10%的SDS至终浓度为1%,小心混匀,37℃放置1小时;7)加20mg/ml的蛋白酶K至终浓度为100μL/ml.于37℃保温2小时;8)用苯酚+氯仿(1:1)抽提1次,再用氯仿抽提1次;加等体积的异丙醇,可观察到有絮状沉淀;9)12000rpm离心10分钟,用70%乙醇洗沉淀,12000rpm离心2分钟,弃上清,挥干沉淀,沉淀溶于10~50μLTE(PH8.0)中;10)用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测染色体提取情况。
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