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谁在做这个实验:核蛋白的免疫荧光定位实验 实验方法
| 实验方法原理 | 免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物带有荧光素,在荧光显微镜下,由于受高压汞灯光源的紫外光照射,荧光素发出明亮的荧光,这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质,并可利用荧光定量技术计算抗原的含量,以达到对抗原物质定位、定性和定量测定的目的。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 核蛋白 试剂、试剂盒 | 甲醇PB一抗二抗 仪器、耗材 | 显微镜玻片盖玻片滴管
实验步骤 | 1. 在22×22mm的1.5号盖玻片上培养细胞。理想条件下细胞应长到50%~70%汇合。 2. 在-20℃用100%甲醇固定细胞3分钟。 3. 用PBS+1%NGS洗三次,每次10分钟。 4. 在湿盒里以适当浓度的一抗室温温育1小时。 5. 用PBS+1%NGS洗三次,每次10分钟。 6. 在湿盒里与稀释为4ug/ml的荧光标记二抗室温温育1小时。 7. 用PBS洗四次,每次10分钟。 8. 用封片剂将盖玻片封在载波片上,用干净的指甲油将盖玻片封边,防止盖玻片滑动。 注意事项 | 1. 要在盖玻片一边角落做记号,以知道细胞在盖玻片的那一面。 2. 一抗的浓度需要经过实验摸索确定。 3. 第四步中如果用22×22mm盖玻片,则在盖玻片上加30ul稀释的抗体,并且将盖玻片倒置在玻璃载玻片上,然后将载玻片放到湿盒里,在室温温育
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