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mayitao /发布时间:1628271002 /浏览量:258

什么是CRISPR?

CRISPR（Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats）,是细菌中用于与病毒进行斗争的免疫武器。生命进化历史上，细菌为了将病毒的外来入侵基因清除，进化出CRISPR系统，利用这个系统，细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除，这是细菌特有的免疫系统。这种切除功能其中比较典型的模式是依靠一个复合物，该复合物能在一段RNA指导下，定向寻找目标DNA序列（图1），并招募一个蛋白（如Cas9）（图2）,Cas9能够将该序列进行切除（图3）。正是基于细菌的这种后天免疫防御机制，CRISPR/Cas9技术应运而生，从而使科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶实现对多种细胞基因组的特定位点（如NHEJ非同源性末端接合)(图4)进行修饰。

为什么要电转？

CRISPR革命已经开始，将CRISPR结构导入特定细胞(如干细胞、神经细胞、造血细胞、受精卵,等等)用普通地方法往往很困难。电穿孔技术可使这些细胞在精确的电脉冲作用下，在细胞膜上形成瞬时的空隙，从而诱导CRISPR结构通过这些空隙进入细胞中。在电脉冲撤离后，细胞恢复原有状态，这种物理学的方式并不影响细胞内部任何代谢及生理变化。

BTX电转和CRISPR

外源物质如何高效的进入目的细胞是进行表达修饰实验（CRISPR、基因编辑、基因工程）成功的关键。BTX电穿孔系统由于它的易用性、重复性、高效率和低毒性，已经成为将CRISPR结构导入细胞（如哺乳动物细胞、细菌、酵母、植物、寄生虫等）的重要手段。

使用BTX系统可进行多种类型转染；

体外培养--贴壁细胞、悬浮细胞及原代细胞·在体·在卵内·在子宫内·离体

使用BTX系统可转染CRISPR到多种细胞，包括很多难转染的细胞。

神经细胞•原代细胞•免疫细胞•胚胎细胞•受精卵•寄生细胞

WhyBTX?

（一）使用新的卵母细胞电极进行卵母细胞/胚胎电转

卵母细胞电极:
●可用于高通量小鼠卵母细胞、受精卵或者胚胎的CRISPR/Cas9基因编辑
●易于使用，快速，高通量
●每次可以操作20–40个卵母细胞
●电转过程可视
●容易收集电转后所有的胚胎细胞

在动物模型中，使用BTX卵母细胞电极配件，可以高效率、高通量进行店转实验。

使用不同的电极存活率不同

（二）使用BTX电转仪将CRISPR/Cas9质粒转染进难转染的细胞。例如：Taxoplasmagondii

A)在Taxoplasmagondii细胞中，CRISPR质粒(pU6-SAG1)切断SAG1位点

B)成功转染的细胞(绿色)与模拟（mock）转染细胞比较

来源:
EfficientGenomeEngineeringofToxoplasmagondiiusingCRISPR/Cas9SidikSM,etal.,2014
PlosOne,volume9,Issue6,July2014

编辑：拽拽拽公主

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