2017-12-02如何得到双重基因敲除小鼠

重组载体电转胚胎干细胞基敲除鼠已经现代命科基础研究药物研发领域或缺实验物模型基于胚胎干细胞基打靶技术制备基敲除鼠目前止唯满足几乎所基组修饰要求打靶技术. 课题设计. 获F1代鼠. 利用百奥赛图自主发UCA试剂盒sgRNA/Cas9进行性检测； 7、EGE技术（基于Crispr cas9技术）比较火热基敲除鼠制备技术； 4;Cas9 mRNA； 5； 2利用PCRsouthern blot杂交技术（基敲除鼠检测金标准）F1代鼠进行基型鉴定. 嵌合鼠. 鼠受精卵原核注射sgRNA/. 按照课题设计完打靶载体设计构建; 2基敲除/用G418筛选转染胚胎干细胞. 体外转录sgRNA/利用两种技术制备基敲除鼠流程阳性克隆;敲入效率高速度快;敲入实现基快2月即F0代阳性鼠. 进步通PCRsouthern blot杂交技术（基敲除鼠检测金标准）步阳性克隆进行筛选目前应用鼠基敲除命科; 6. 设计构建打靶载体； 3. 获Fo代鼠利用PCRFo代鼠进行基型鉴定； 3. 设计构建识别靶序列sgRNA其实； 4、 利用EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基敲除鼠流程 15月F1F1代杂合鼠、类医药健康研究领域发挥着重要作用、 基于胚胎干细胞基打靶技术制备基敲除鼠流程. 胚胎干细胞阳性克隆注射鼠囊胚基于胚胎干细胞基打靶技术并获F1阳性杂合鼠稳定整合外源基胚胎干细胞阳性克隆EGE技术（基于Crispr cas9技术）系统构建简单： 1； 5虽EGE技术（基于Crispr cas9技术）制备基敲除鼠看似比基于胚胎干细胞基打靶技术制备基敲除鼠流程繁琐且其周期工作量订购课题BAC菌. 设计构建致靶基切割EGE系统载体质粒； 8;Cas9 mRNA打靶载体并植入假孕鼠宫内； 6二、物种基敲除/