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回复:时间:2021-08-09
楼主想多了,其实shRNA就是根据siRNA来设计的。比如说你先设计了几对siRNA,经过转染后检测目的基因表达情况,可以筛选一条沉默效果最好的siRNA,但siRNA是化学合成的只能瞬转,用完了还得买,如果想做长期研究的话就可以构建shRNA载体了, 用siRNA的序列加段loop来设计出shRNA,再连上质粒或病毒载体就可以了。具体还可以参考以前园子里面的帖子:【原创】miRNA,siRNA,dsRNA与shRNA的区别 【求助】shRNA和siRNA的区别【求助】shRNA和siRNA有啥区别? 【求助】shRNA与 siRNA的区别 【求助】请教关于shRNA和siRNA选择
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回复:时间:2021-08-11
简单点说,稳转用shRNA病毒,瞬时实验用siRNA。如果你构建shRNA质粒做瞬转,就有点画蛇添足了,siRNA合成现在很便宜,300多一条,构建一个质粒成本远远高于这个,还有干扰一般做一个没有保障,多做几个费用更高,现在的siRNA专用转染试剂可以把siRNA高效转染细胞的,包括大部分原代细胞,比如Life的RNAimax,Transheep的Namipo,都可以的,而且毒性低,可以反向转染,多加几次也能延长左右时间。如果你要构建细胞系,那必须用shRNA慢病毒,human和mus的一般公司都有现货的克隆的,比自己构建省事省钱,sigma和Transheep都有这样的文库,几乎所有的基因都能查到的,一个基因可以提供几个克隆的,干嘛自己辛苦去构建,拿回来自己包装病毒就行,下面是我转染的siRNA-CY5到原代神经元,用的Namipo
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