下一代固相染色质免疫沉淀（ChIP）分析技术
—Chromatrap®染色质免疫沉淀（ChIP）系列
新型Chromatrap染色质免疫沉淀反应(ChIP)测定法是PorvairSciences公司与英国斯旺西大学的生命科学院联合研发的成果，它采用与蛋白质A或G结合的固相多孔聚合物来捕获染色质，较磁珠法的效率得以极大提高。
独立实验表明，Chromatrap离心柱法比传统磁珠法DNAPullDown水平高出25倍，DNA富集的信噪比尤为显著，要比磁珠法高出2至3倍，即使沉淀反应的样品用量在50ng－3000ng，都能得出十分稳定的结果。

Chromatrap®ChIP简化qPCR分析流程 5小时内制备染色质
Chromatrap®是一种更快、更简单、更有效的ChIP-seq测定方式（专利号：GB2482209），确保在5小时内制备染色质用于qPCR分析。
qPCR分析所用的Chromatrap®试剂盒采用革命性的Chromatrap®蛋白质A或蛋白质G完成共价连接的圆盘状惰性多孔聚合物捕获目标染色质/抗体复合物，大大提高了捕获效率。反应只需三个缓冲液和一步洗脱步骤冲洗即能得到目标DNA片段。操作中不需要使用磁珠或琼脂糖珠，消除了非特异性背景并大大减少人工操作误差和样品损失。优化的洗脱缓冲液允许样品直接在qPCR中分析，而不需要进行DNA纯化，从而进一步降低样品损失。
 
ChIP-seq是一项应用于DNA结合蛋白和组蛋白修饰的全基因组分析技术。基于96孔板的高通量分析，是全球首个研究复杂，协调基因调控和表观遗传机制的绝佳工具。

Chromatrap与传统方式相比优势：

• FASTER：更快速

• EASIERtouse：操作更简易

• 对低丰度目标来讲特异性更敏感        

• DNA富集的信噪比比其他方法提高到2至3倍                        

• qpcr无需对DNA进行纯化，5小时内制备染色质

• 宽动态范围更适合芯片测序（50ng-7000ng）

• 单柱与96孔用于高通量分析

• 允许从单个样品中进行chip实验

• 少人工处理，消除了通过多步移液操作样品损失
  
  EpigeneticsResearchersEnthuseOverChromatrap®ChIPtechnology－表观遗传学研究人员热衷于Chromatrap®芯片技术
  
   
  Chromatrap®FFPE 
  与传统方法相比Chromatrap®FFPE优势：
     ●少10倍原料●只需要103微米的部分●至少优于竞争产品4倍信噪比
  
  
  
  
   

  利用Chromatrap®固态ChIP技术优势制备下一代测序库所需的纯化染色质
  
  染色质免疫沉淀反应(ChIP)是一项用于检测蛋白质和DNA之间相互作用的技术，以富集特定蛋白质相关的DNA为基础。该技术将ChIP与大量同步定序法相结合(ChIP-seq)，以准确调查蛋白质与DNA之间的相互作用，顺利开展表观遗传学标记研究，从而帮助人们全面了解基因转录调节。蛋白质与DNA之间精准又详尽的映射图至关重要，有助于解开很多生理流程和疾病状态（包括癌症）背后的调节网络。最近的先进技术发现染色质和转录之间相互作用的动态性和复杂度远远超出人们最初的预测。之前采用微阵列的技术受限于低聚核苷酸探头的数量，因为大量不同物种特定探头对于芯片表面可能过于混乱。下一代测序技术可以同时测定数千万或数亿DNA短片段的序列，而且不会造成阵列的混乱。ChIP-seq法可以精确到每个碱基对的分辨率，减少了伪影，增加了覆盖面，扩大了动态范围，具有过去技术所不具备的显著优势，让几年前只能想象的实验变成了现实。
  Chromatrap®是一种更快、更简单、更有效的ChIP-seq测定方式（专利号：GB2482209）。它采与蛋白质A或蛋白质G完成共价连接的圆盘状惰性多孔聚合物捕获目标染色质/抗体复合物，大大提高了捕获效率。Chromatrap将固态技术和高通量测序法相结合，从而可以从少量细胞和染色质浓缩物中获取准确的ChIP-seq协议。ChromatrapChIP-seq特别适用于更高的染色质浓度，现在还将Chromatrap的动态范围与下游深度测序的分析主力相结合，从而可以在基因组中识别转录因子结合位点，以及与蛋白质修饰关联的特定DNA，完全不存在规模和分辨率方面的限制。
  
  
  一、可使用更少的细胞进行ChIP检测
  Chromatrap®发布了一个新的应用说明，演示了其独特的固态专利技术如何提供无与伦比的灵敏度，允许用户进行ChIP测定，使用少至1000个细胞每个免疫沉淀。
  
  通常需要大细胞数来进行ChIP，这在处理有限的起始材料时构成了挑战。用于处理少量样品，稀有细胞类型或提供低丰度染色质的困难细胞类型的可用技术通常是耗时长且步骤复杂的，并涉及DNA扩增或来自另一来源的具有染色质的样品的峰值。
  
  在应用指南中，作者证明了Chromatrap®ChIP-seq试剂盒的卓越的灵敏度和宽动态范围，使用户能够从少至1000个细胞进行ChIP，富集水平无差异，与初试细胞数量浓度无关。
  
  在2012-2015的Chromatrap®固态芯片技术全球推出了许多项目中得到证明：比传统的基于磁珠法和琼脂糖法更有效。这是因为固相多孔聚合物与任一蛋白质A或G在捕捉染色质时更有效，它具有低非特异性结合。此外，它采用了离心柱的方法，速度显著提高，较琼脂糖或磁珠法更为快速、简便、高效。Chromatrap®的DNApulldown水平是传统方法25倍，而DNA富集信噪比高至2至3倍，即使样品在50ng-3000ng同样可以做免疫沉淀。
  
  二、表观遗传学研究人员热衷于Chromatrap®－ChIP技术———
  Porvairsciences和参与表观遗传学研究的生物制药组织的报告分析了他们对Chromatrap®ChIP强劲增长的需求（芯片）。
  
  
  1.Porvairsciences销售总监StephenKnight说：“越来越多的成熟应用解决方案和Chromatrap®96HT固态ChIP高通量平台的引入使我们在过去12个月内使用ChromaTrap测定技术的研究团队数量增加了一倍以上“。他补充说：“我们对技术的早期采用者的非常积极的反馈感到特别高兴。
  
  2.BrianJ.Engel,aBiochemistry&CellBIOLOGyresearcheratRiceUniversity,USA，评论说：与传统的基于磁珠法的ChIP测定相比，我最喜欢Chromatrap试剂盒的是易用性，快速和可靠性。不用担心在使用基于磁珠法时在洗涤过程中意外丢失磁珠和减少染色质”。
  他的同事CurtWarren补充说：”我们发现Chromatrap试剂盒快速，可靠和灵活。使用此套件节省试剂和时间，使基于IP的实验更加简单，更加可行。使用Chromatrap增强的重现性，我不会再使用基于磁珠法的ChIP试剂盒，ChromaTrap-ChIP已被我们的研究团队完全支持和采纳。
  
  3.ProfessorSteveConlan,HeadofMolecular&CellBiologyatSwanseaUniversity,UK，评论说：“Chromatrap简化与染色质IP相关的复杂的实验过程，与常规的磁珠法相比，它更快速和更友好，获得更一致的数据，最重要的是可以使用更少的input样品。我们已经永久性地切换到使用Chromatrap进行我们所有的细胞系和基于原代细胞的测定，并完全支持该技术。研究助理-HelenWhiteland博士补充说：“我喜欢Chromatrap技术的易用性和快捷的方法让我在同一天来分析我的数据”。
  ProfessorSteveConlan
  研究重点是妇女的健康，这涉及到妇女不孕不育妇科和妇科肿瘤学，如子宫癌，子宫内膜，子宫内膜和卵巢癌。
  妇科肿瘤学的研究集中于理解基因如何调节或它们如何在疾病中失调的机制；以及对子宫内膜表面以及卵巢功能的影响。大约几年前，当我们开始推动表观遗传学研究时，可用的技术非常有限。
  我们一直在与英国Porvair一起开发Chromatrap-ChIP技术，使表观遗传学研究更简单，更有效，更快，并帮助我们推进我们的研究。
  
  4. Chromatrap®96：用于高通量染色质免疫沉淀（ChIP）的新型固态平台
  表观遗传学是一个快速增长的研究领域，具有广泛的应用，包括疾病机制剖析和个性化医学策略。ChIP是表观遗传学研究的关键。
  NatureMethods一篇文章：Chromatrap®96-一个高通量的ChIP分析平台的介绍，在一天内如何分析多达96个转录因子和表观遗传修饰。其独特的固态平台如何实现灵敏，选择性和可重复的靶扩增，具有优异的信噪比，即使样品小至0.1μg。此外，作者还表明平台与自动处理的兼容性允许同时检测，为表观遗传学提供前所未有的ChIP测定的灵活性和高效、高速。
  
  5.从子宫内膜基质细胞富集高丰度表观遗传标记
  Chromatrap®是用于染色质免疫沉淀（ChIP）测定的新型固体基质，可从PorvairSciences获得，已经成功用于从困难的活检材料中分离高质量染色质。
  
  聚焦于从原发性子宫内膜基质细胞的表观遗传标记的沉淀，研究人员已经从分离自组织活检的100万细胞产生了高丰度的表观遗传标记的优异的富集。使用Chromatrap的选择性富集通过相对于阴性IgG选择性扩增阳性和阴性基因靶标而突出。此外，所述的工作展示了ChromatrapChIP检测试剂盒如何能够描绘活性和抑制性相关标记之间的平衡，并且还与人体组织相容。
  
  Chromatrap®使用用蛋白A或G功能化的固相多孔聚合物，比基于磁珠法具有更大的染色质和抗体捕获。与基于琼脂糖法或磁珠的传统方法相比，Chromatrap旋转柱方法提供了显着的优点，其涉及许多步骤的分离，移液和重悬浮。使用Chromatrap的独立测试证明测定的可重复性，并且在负IgG背景上的强的倍数扩增使得能够在多个基因靶标上靶向丰富和低丰度标记。DNApulldown水平比使用传统的基于磁珠法高25倍，即使样品小至50ng-3000ng，染色质免疫沉淀使Chromatrap亦可用于小规模活检。
  
  6. Chromatrap报告了ChIP技术在开创性研究中的优势
  
  Chromatrap报道了在不同着同行评议期刊上发表的另外3篇客户论文，其中引用了其专有固态染色质免疫沉淀（ChIP）技术如何实现了开创性研究。
  
  最近发表在DrugMetabolism＆Deposition上的研究观察了染色质结构变化在调节人CYP3A个体发育中的作用。
  
  本文发现药物代谢酶的发展中可变轨迹有助于个体之间对化学毒性和对药物的不良反应的敏感性的差异，特别是在生命的早期阶段。本文着眼于与可能涉及的这些个体间差异相关的目前未知的因素。通过观察在各个年龄的个体中的辨别的CYP3A4和3A7调节结构域，组蛋白修饰可以用于研究使用ChromatrapChIP试剂盒阐明的染色质的结构动力学。
  
  结果发表在免疫学杂志审查如何“中度酒精诱导应激蛋白HSF1和hsp70和抑制促炎细胞因子导致内毒素耐受”。研究人员讨论如何乏力或中度酒精暴露导致受损的宿主防御感染。这种易感性显示是由于受损的先天免疫反应。该研究探索了醇介导这种免疫抑制的分子机制，但没有得到确切的结论。马萨诸塞大学医学院的医学系在本文中显示细胞应激蛋白HSF1和hsp70在酒精介导的TLR4/MyD88通路抑制中发挥的机械作用。
  
  三、ChromaTrap在应用研究中获得积极评价
  
  1.在CRWilliams等人（AmJPhysiolCellPhysiol303:C213-C223,2012）的论文中-使用Chromatrap评估NFkBp65对正常和高度治疗的人类主动脉内皮细胞中的Nox4启动子的葡萄糖。使用ChromatrapproA离心柱的ChIP数据证明，在高浓度葡萄糖下，与正常浓度葡萄糖相比，NfkB与Nox4启动子的结合增加，并且罗格列酮减弱NfkB与启动子的结合。发现说明NFkB/p65-Nox4轴作为高血糖后血管内皮细胞中rosigliatzone的重要靶标。
  
  2.在C.Sullivan等人的论文（PLOSONE,2012,12月,7（12）,第7-13页）中，使用Chromatrap检测人类（U205）骨肉瘤细胞中FOXM1转录因子与CDC25A基因的关联线和CWR22rv前列腺癌细胞系。使用ChromatrapProA柱评估FOXM1对CDC25A的结合活性，当与两种细胞系中的阴性IgG相比较时，显示出FOXM1显着富集于CDC25A基因上。该研究支持该假说并报道了CDC25A是FOXM1转录因子的直接靶基因的新机制。两篇论文都利用ChromatrapChIP方案的快速（小于5小时），使用离心式固体检测的简易性以及非常低的非特异性结合优异的DNApulldown和高信噪比，特异性结合和避免磁珠的损失。
  
  3.UniversityofWisconsin-MADIson:“如果你使用Chromatrap®，这将是你做过的最简单的ChIP-Seq实验！
  －Chromatrap®被许多企业和实验室使用，并且乐于听到我们革命性的固态平台的染色质免疫沉淀是如何帮助他们的研究。
  
  UniversityofWisconsin-Madison研究助理Ashika-SitaJayanthy使用Chromatrap®的ChIP-Seq试剂盒的经验。
  
  
  1)你目前在威斯康星大学麦迪逊分校学习什么？
  我是大学五年级研究生，我正在研究MITF，这是黑色素瘤中的关键转录因子。
  
  2)你的典型工作日是什么？
  我花了相当多的时间在做细胞生物学，细胞培养和研究qPCR。我总是很忙！
  
  3)你为什么选择这个特定的研究领域？
  这是一个非常重要的课题，特别是在它可能对黑色素瘤治疗的影响。我还认为这将真正帮助我提高在生物制剂和细胞分子生物学方面开发技能。
  
  4)您什么时候第一次听说Chromatrap®？
  我参加了2016年AACR年会，他们给我发了一个工具包。因为抗体的原因我没有及时得到结果，但我被告知Chromatrap®对我的实验很有帮助。
  
  5)你使用Chromatrap®的经验是什么？
  我使用的试剂盒qPCR，我非常喜欢它！在我开始使用该Chromatrap®套件之前，我非常不确定，它将像往常一样，ChIP-Seq从开始到完成需要几天。我决定试一下，当我使用了它，我简直不能相信，因为我在一天内做完了一切！这也不是疲惫的一天，这是非常正常的一天！
  
  6)qPCR结果是什么？
  第二天我看着qPCR的结果，一切都很漂亮！它看起来惊人，结果太棒了。因为我在过去有这么多失败的结果，所以看到一些积极的结果简直太伟大了。
  
  7)什么使Chromatrap®独一无二？
  我会说，Chromatrap®的套件太棒了！我相信市场上没有其他ChIP试剂盒能如此简单。Chromatrap®字面意思是孵化混合物的柱子。我以前没有尝试过类似的东西。
  
  8)您会推荐Chromatrap®吗？
  绝对！我会说，这将是最简单的ChIP-Seq实验，我曾经做过！每个人都应该试试！
  
  
  4．HarvardUniversity:“Chromatrap®是一种使用方便，效率更高，对染色质免疫沉淀非常有效的产品
  －Chromatrap®目前正在世界各地的实验室和研究机构中使用，因为他们亲眼看到了其革命性技术的好处。Chromatrap®是用于染色质免疫沉淀的固态平台，其使用离心柱或96孔微量培养板。
  
  哈佛大学已经使用Chromatrap®多年，赞誉很高。哈佛大学博士后研究员CurtisWarren于2012年首次使用Chromatrap®，他使用试剂盒的经验。
  
  9)你在哈佛大学做什么？
  我是博士后研究员，我在哈佛大学干细胞研究所做研究，在那里我们使用人类多能干细胞研究心血管疾病和糖尿病。
  
  10)您什么时候第一次听说Chromatrap®？
  在德克萨斯州的研究生期间，每次我想做CHIP我都使用Chromatrap®。
  
  11)您为什么喜欢使用Chromatrap®？
  在Chromatrap®的情况下，它完全可以替代老式的和更费力的基于磁珠法ChIP试剂盒。Chromatrap®更简便易用，更高的效率和效益。如果你将Chromatrap®与其他ChIP旧方法相比，它可以节省你一整天的时间！Chromatrap®的创新设计独一无二。
  
  12)为什么要向其他研究者推荐Chromatrap？
  Chromatrap®的重要之处在于它的效率和易用性，以及它实际工作的事实！过去使用ChIP的人认为这项技术的费时费力，步骤极其繁琐。如果他们想减少时间和精力，并得到优异的结果，我一定会推荐Chromatrap®！
  
  5.ProfessorSteveConlan对Chromatrap的概述
  
  13)Chromatrap的高效性？
  我们开发了一种称为Chromatrap的技术，其基本上是从离心柱上富集DNA方法。我们将实验时间从几天减少到能够在一天内完成整个过程，这让我们可以处理更多的样品。
  
  14)在您的研究中高通量分析有多重要？
  我们与医院非常密切合作。我们每天都有患者样本，所以更多的样本可以通过，更强大的我们的数据分析，以及更好地了解我们可以澄清的疾病过程。
  
  15)你关注什么类型的修改，为什么？
  我们非常感兴趣的表观遗传标记，DNA甲基化，组蛋白乙酰化如何改变癌
  症。如果能够理解，那么我们可以考虑在这些癌症中使用什么药物来使这些
  患者的细胞恢复正常？
  我们专注于组蛋白修饰。有很多修饰，我们可以看看，我们针对每一个修饰
  需要专门的抗体。如果能够理解，我们可以解释癌症如何变化？然后我们使
  用可用于治疗白血病的药物靶向参与该过程的酶，例如组蛋白脱乙酰酶，并
  观察我们是否可以将其应用于实体瘤癌症。
  
  16)你认为Chromatrap会有什么影响？
  表观遗传分析复杂，这个技术很困难。Chromatrap套件－允许我们进行高通
  量分析。这会在个体化医学中大有益处。Chromatrap套件也适用于高通量自
  动化，如果我们要分析每个患者的表观基因组，这就是我们需要去做的。
  例如，能够针对患者的药物使用。我们将需要知道他们的表观遗传图谱和简
  单的颠覆性的技术，可以嵌入病理实验室。
  
  17)您认为未来对伴随诊断有什么看法？
  伴随诊断是一个迅速出现的新兴市场，该领域中大多数企业正与制药公司合
  作。比如：在给药之前做测试是必不可少的。
  目前，我们的表观遗传学研究是关于药物与生物标记。这是一个非常早期的
  阶段，但它是一个不断发展的领域，它将在未来产生巨大的影响。