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제품특징
□ 제품 설명
End-Point PCR을 이용하는 경우, 특히 식품·환경 검사등 같은 PCR 반응을 반복적으로 실시할 때 carryover에 의하여 가짜 양성(false positive) 결과가 나올 위험성이 높다. 본 제품은 반복적인 반응시 이러한 carryover에 의한 가짜 양성을 방지하기 위한 제품이다.본 제품에서는 dTTP 대신에 dUTP를 기질로 이용하고, hot start PCR 효소 TaKaRa Taq HS를 이용하여 증폭을 실시한다. PCR 반응액 조제 후, 우라실(uracil)을 포함한 DNA를 분해하는 효소인 UNG(Uracil-N-glycosylase)를 작용시키면, 우라실을 포함한 이전 반응 PCR 산물은 UNG에 의해 분해되지만, 새로이 더해진 주형은 분해되지 않기 때문에, carryover의 영향을 받지 않고 PCR 증폭을 실시할 수 있다.
□ UNG에 의한 분해
UNG에 의한 분해과정은 다음과 같다. PCR 반응전에 25℃, 10 분간 incubation하면, PCR 반응액에 혼입되어 있는 우라실을 포함한 PCR 산물에는 UNG에 의한 가수분해 과정에 의해 deoxyribose sugar와 우라실 염기 사이에 N-glycosylic bond가 끊겨 탈필리미딘 부위가 생성된다. 이어서 95℃에서 2분간 열처리를 하면, UNG를 실활시키면서, 동시에 혼입된 DNA단편은 탈염기 부위에서 phosphate backbone이 가수분해되어 절단, 분해된다. UNG는 우라실을 포함한 single strand DNA와 double strand DNA는 가수분해하지만, RNA에는 작용하지 않는다.
□ 내용
R013S (50회 : PCR 50 μl 반응시)
1. TaKaRa Taq HS(5 U/μl) | 12.5 μl |
2. 10×PCR Buffer for UNG plus*1(10×) | 250 μl |
3. dU plus dNTP Mixture*2(12.5×) | 200 μl |
4. UNG(2 U/μl) | 25 μl |
R013A (200 회：PCR 50 μl 반응시)
1. TaKaRa Taq HS(5 U/μl) | 50 μl |
2. 10×PCR Buffer for UNG plus*1(10×) | 1 ml |
3. dU plus dNTP Mixture*2(12.5×) | 800 μl |
4. UNG(2 U/μl) | 100 μl |
*1 Mg2+농도：22.5 mM (10×)
본 제품은 dUTP 가 dTTP의 3배 농도로 첨가되어 있기 때문에, 전체적으로 dNTP 농도가 높아진다. MgCl2와 dNTP의 양의 밸런스를 유지하기 위해, 일반적인 TaKaRa Taq Hot StartVersion(Code R007A)에 포함되어 있는 10×PCR Buffer(Mg2+ plus)보다 Mg2＋농도가 높다.
*2 dU plus dNTP Mixture：아래 조성을 가진 수용액(sodium salt)이다.dUTP 7.5 mM / dATP 2.5 mM / dGTP 2.5 mM / dCTP 2.5 mM
□ 보존
- 20℃
