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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 농도 200 U/㎕
□ 형상
20 mM | Tris-HCl (pH7.8) | |
100 mM | NaCl | |
1 mM | EDTA | |
1 mM | DTT | |
50% | Glycerol(v/v) |
□ 보존 -20℃
□ 5× PrimeScript Buffer (cDNA 합성용)
250 mM | Tris-HCl (pH8.3) | |
375 mM | KCl | |
15 mM | MgCl2 |
□ 제품설명
본 제품은 M-MLV(Moloney Murine Leukemia Virus) 유래의 Reverse Transcriptase를 기반으로 하여 다카라가 독자적으로 개발한 신규 역전사 효소이다. 본 제품은 신장성이 매우 뛰어나 긴 cDNA를 합성할 수 있다. 또, GC rich 등과 같이 cDNA 합성이 어려운 RNA에 대해서도 RNA가 분해될 우려가 있는 고온에서의 반응은 필요로 하지 않으며, 표준 역전사 반응 온도(42℃)에서 효율적으로 cDNA를 합성할 수 있다. 본 효소는 긴 cDNA의 조제나 full length cDNA의 비율이 높은 library 제작에 최적이다.
□ PrimeScrip RTase 이용 42℃ 반응온도로, 백그라운드가 낮은 고품질의 cDNA 합성 가능
RNA Ladder (1~12kb)를 주형으로, PrimeScript 및 타사 RTase를 이용하여 역전사 반응.
□ 활성의 정의
Poly(rA)- oligo(dT)12-18 를 주형/프라이머로 하여 37℃, 10분간 1 nmol의 [3H]dTTP를 합성기질로 사용하는 것을 효소 활성
1U으로 한다.
□ 활성측정용 반응액 조성
50 mM | Tris-HCl (pH8.3) | |
75 mM | KCl | |
8 mM | MgCl2 | |
10 mM | DTT | |
20 ug/ml | (rA)n - (dT)12-18 | |
0.5 mM | [3H]dTTP | |
0.1% | NP-40 |
□ 1st-strand cDNA 합성시험
표준 실험법(프로토콜)에 따라 랫트 뇌 유래의 Total RNA 100 ng을 주형으로 하여 Oligo dT 프라이머 50 pmol 및 본 효소 200 units을 이용하여 42℃에서 60분간 1st-strand cDNA 합성 반응을 한다. 이 cDNA 반응액을 주형으로 PCR 하여 아가로즈 겔에 전기 영동한 결과 12 kb의 size 위치에서 명확한 밴드를 확인하였다.
□ 순도
1. 200 U의 본 효소와 1㎍의 λDNA-Hind III 분해물을 37℃, 1시간 반응시켜도 DNA 전기 영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.2. 200 U의 본 효소와 1㎍의 supercoiled pBR322 DNA를 37℃, 1시간 반응시켜도 DNA 전기 영동 패턴에 변화가 일어나지
않는다.3. 200 U의 본 효소와 1㎍의 23S 및 16S rRNA 혼합물을 37℃, 1시간 반응시켜도 RNA 전기 영동 패턴에 변화가 일어나지 않는다.
□ 용도
- 1st-strand cDNA 합성- cDNA probe 조제- RT- PCR
□ 정확도가 매우 높은 역전사효소
