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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 내용 (10회)
| pKF3 DNA (0.5 ㎍/㎕) | 20㎕ |
| E. coli TH2 Competent Cells | 100㎕×10 |
□ 보존
pKF3 DNA : -20℃E. coli TH2 Competent Cells : -80℃
□ 제품설명
Enforcement Cloning System pKF3는 Hashimoto-Gotoh, T. 등의 Enforcement-cloning법을 시스템화한 것이다. 외래 유전자가 삽입된 클론만이 생육하고, 삽입되지 않은 클론은 생육저해를 일으키기 때문에 클론의 선별을 생육의 유무에 따라 판별할 수 있는 클로닝 시스템이다.종래의 방법은 insert 효율을 높이기 위하여 벡터쪽을 탈인산화하여 self-ligation을 억제하였으나 이 시스템은 insert DNA를 삽입한 플라스미드 (pKF3)로 형질전환한 숙주 (E. coli TH2)만이 클로니를 형성하기 때문에 탈인산화가 필요없다.반대로 insert를 탈인산화하여 insert 간에 multiple 라이게이션을 막을 수 있어, 아주 미량의 시료에서도 높은 효율로 pKF3에 삽입할 수 있으므로 (표 1), DNA 라이브러리 제작 등에 최적이다. 또한 염기서열 분석시 pKF3 Sequencing Primer를 사용한다.Insert를 탈인산화한 경우의 삽입 효율
EcoR I 인식부위를 말단에 가진 카나마이신 내성 유전자를 탈인산화한 후 pKF3에 연결하였다.
Ligation 비율*(Insert DNA/pKF3) | 1.0 | 0.1 | 0.01 |
총 형질전환주 수(Cm+Sm plate) | ( > 4,000) | ( > 2,000) | 431 |
Km 내성주/Screening 수 | 100/100 | 98/100 | 92/100 |
* Ligation의 비율은 몰 비로 나타낸다 (pKF3은 0.1㎍).
