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제품특징
□ 특징
● DNA중 시토신(cytosine) 잔기의 변환에서 회수까지 불과 90분
● 50 pg의 genomic DNA로 검출 가능
● 높은 변환 효율
□ 제품 설명
본 제품은 DNA메틸화 상태를 해석하기 위한 제품으로 개량된bisulfite (아황산 수소 나트륨)법을 이용하여, DNA중인 메틸화되지 않은(비 메틸화) 시토신 잔기를 우라실(uracil)로 변환한다. 한편 메틸화 시토신(5-mC)은 본 처리에 의해서 변환되지 않기때문에 메틸화 시토신과 비 메틸화 시토신을 구별할 수 있다. Bisulfite 처리 후에 비 메틸화 DNA와 메틸화 DNA는 다른염기 서열을 가지게 되므로, PCR증폭 후에 sequencing, 제한효소처리 등의 방법으로 DNA메틸화를 분석할 수 있다.본 제품을 이용하면 불과 50 pg의 DNA로도 검출이 가능하며, bisulfate 처리 후 사용이 편리한컬럼을 이용하여 DNA를 회수한다. 본 제품은 기존 제품에 비해서 짧은 시간에 경제적으로 실험이 가능하며, 배아발생, 유전자 발현, 크로마틴 기능, 유전체 각인, 암 등 질병 연구의DNA메틸화 분석에 유용하다.[추가 실험을 위한 PCR증폭시]Bisulfite 처리된 DNA를 주형으로 bisulfite sequence와 COBRA법을 위한 PCR 증폭을 진행하는 경우,TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA)(TakaraCode R110A/B)의 사용을 권장한다. 또한 Real Time PCR과 end point PCR에서 메틸화특이적 PCR (Methylation Specific PCR:MSP)를 분석하는 경우에는 EpiScope MSP Kit (Takara Code R100A/B)의 사용을 권장한다.
□ 내용
Reagent 1 | 5.0 ml× 2 |
Reagent 2 | 3.3 g× 2 |
Reagent 3 | 10.6 ml |
Reagent 4 | 5.5 ml |
Reagent 5 | 5.0 ml |
Control Sample 1(미처리 DNA) | 40 μl |
Control Sample 2(bisulfite 처리된 DNA) | 20 μl |
Control Primer3A (1st PCR용 프라이머) | 40 μl |
Control Primer3B (2nd PCR용 프라이머) | 40 μl |
PurificationColumns | 40 개 |
Collection tubes | 2 ml tube× 40 |
□ Bisulfite 원리
Bisulfite 처리에 의해 DNA 분자의 시토신 잔기를 우라실로 변환한다.
□ Bisulfite 처리와 PCR 증폭
Bisulfite 처리로 DNA중 메틸화되지않은 시토신 (비 메틸화 시토신)은 우라실로 변환되고, 메틸화 시토신(mC)은 변환되지 않는다. 따라서 bisulfite 처리로 메틸화 시토신과 비 메틸화 시토신을구별할 수 있다.
□ 수송 실온
□ 보존
Control Sample 1,2, Control Primer 3A, 3B는 수취 후, -20 ℃에서 보관* MethylEasy는 Human Genetic Signatures사의 트레이드 마크입니다.
