RCADNAamplificationkitsarenovelproductsdevelopedspecificallytopreparetemplatesforDNAsequencing.TheRCAmethodutilizesbacteriophagephi29DNApolymerasetoexponentiallyamplifysingle-ordouble-strandedcircularDNAtemplatesbyrollingcircleamplification(RCA).ThisisothermalamplificationmethodproducesmicrogramquantitiesofDNAfrompicogramamountsofstartingmaterialinafewhours.
Description: RCADNAamplificationkitsarenovelproductsdevelopedspecificallytopreparetemplatesforDNAsequencing.AsillustratedinFigure1,theRCAmethodutilizesbacteriophagephi29DNApolymerasetoexponentiallyamplifysingle-ordouble-strandedcircularDNAtemplatesbyrollingcircleamplification(RCA)(1,2).ThisisothermalamplificationmethodproducesmicrogramquantitiesofDNAfrompicogramamountsofstartingmaterialinafewhours.
AmplificationinvitroofverysmallamountsoftemplateDNAeliminatestheneedforovernightcellcultureandconventionalplasmidorM13DNApurification.TheproofreADIngactivityofphi29DNApolymeraseensureshighfidelityDNAreplication.(3)
Thestartingmaterialforamplificationcanbeasmallamountofbacterialcellscontainingaplasmid,anisolatedplasmid,intactM13phage,oranycircularDNAsample.BacterialcoloniescanbepickedfromagarplatesandaddeddirectlytotheRCAreaction.Alternatively,microliterquantitiesofasaturatedbacterialcultureoraglycerolstockcanserveasstartingmaterial.Dependingonthesourceofstartingmaterial,amplificationiscompletedin4–18hoursat30˚Cwithnoneedforthermalcycling.TheproductoftheRCAreactionishighmolecularweight,double-strandedconcatemersofthecirculartemplate.
NotethatwhenstartingwithM13clones,theRCAproductisdouble-strandedDNAandcanbesequencedwithforwardandreverseprimers.DNAamplifiedbytheRCAmethodcanbeuseddirectlyincyclesequencingreactionswithoutanypurification.
Figure:
 Figure1,SchematicdiagramoftheRCAprocess.RandomhexamerprimersannealtothecirculartemplateDNAatmultiplesites.Phi29DNApolymeraseextendseachoftheseprimers.WhentheDNApolymerasereachesadownstreamextendedprimer,stranddisplacementsynthesisoccurs.Thedisplacedstrandisrenderedsingle-strandedandavailabletobeprimedbymorehexamerprimer.Theprocesscontinues,resultinginexponential,isothermalamplification.
 Figure2. Components: RCADNAAmplificationKit(100reactions) Cat#:PPK-100 Phi29DNAPolymerase,20µl,(10,000units/ml) 2xMCRCAmix,1ml CellLysisBuffer,1ml RCADNAAmplificationKit(500reactions) Cat#:PPK-200 Phi29DNAPolymerase,100µl,(10,000units/ml) 2xMCRCAmix,5ml CellLysisBuffer,5ml References: 1.Dean,F.etal.,GenomeResearch11,1095–1099(2001). 2.Lizardi,P.etal.,Nat.Genet.19,225–232(1998). 3.Estaban,J.A.etal.,J.Biol.Chem.268,2719–2726(1993). |
Molecular Cloning Laboratories(MCLAB)成立于1998年,是为生命科学界提供基因组研究耗材和服务的先进者。
MCLAB提供具有成本效益的消耗品和试剂,专注于代以及新一代测序和DNA片段分析。我们提供大量分子生物学相关产品,包括抗体,生化试剂,克隆试剂盒,酶,PCR试剂盒,蛋白质凝胶和溶液等。作为我们自己的制造商,我们可以控制生产流程,并大限度地减少定制和大规模订单的延迟。它有助于确保我们的客户获得高质量和价值。
MCLAB拥有一支由20 多位经验丰富的科学家组成的团队,致力于为研究人员提供的服务。我们专注于基因组学领域,拥有DNA测序,发酵,片段分析,分子克隆,过表达,蛋白质纯化和蛋白质合成方面的专家。我们采用量身定制的客户服务方式,让您有机会定制您的项目,并直接与我们的科学家团队交流以获得技术支持。凭借二十多年的经验,我们才华横溢,技术的员工致力于为您提供所需的成果。
10 x PBS(磷酸盐缓冲盐水)
磷酸盐缓冲盐水(PBS)是一种平衡盐溶液,用于各种细胞培养应用,例如在解离前洗涤细胞,运输细胞或组织样品,稀释细胞用于计数和制备试剂。PBS配制成不含钙和镁,用于在细胞解离前从培养物中冲洗螯合剂。
名称
货号
描述
10 x PBS(磷酸盐缓冲盐水)
PBS10-100
500毫升
10 x PBS(磷酸盐缓冲盐水)
PBS10-200
1升
10 x PBS(磷酸盐缓冲盐水)
PBS10-OEM
OEM
描述:
磷酸盐缓冲盐水(PBS)是一种平衡盐溶液,用于各种细胞培养应用,如解离前洗涤细胞,运输细胞或组织样品,稀释细胞进行计数,以及制备试剂。PBS配制成不含钙和镁,用于在细胞解离前从培养物中冲洗螯合剂。
应用:
浓缩的标准磷酸盐缓冲溶液。
pH范围: 7.3 - 7.5
推荐储存条件:室温
部分产品:
名称
货号
尺寸
浓度
大肠杆菌DNA连接酶
EDLA-100
1,000个单位
10,000 U / ml
大肠杆菌DNA连接酶
EDLA-200
5,000个单位
10,000 U / ml
大肠杆菌DNA连接酶
EDLA-OEM
任何尺寸
APE 1
APE-100
3,750 units
15,000 U/ml
APE 1
APE-200
15,000 units
15,000 U/ml
APE 1
APE-OEM
Any Size
名称
货号
描述
I-5™2X高保真混色
I5HM-100
100次反应(50μl体积)
I-5™2X高保真混色
I5HM-200
500次反应(50μl体积)
I-5™2X高保真混色
I5HM-5000
5,000次反应(50μl体积)
I-5™2X高保真混色
I5HM-25K
25,000次反应(50μl体积)
I-5™2X高保真混色
I5HM-OEM
OEM
名称
货号
描述
2x BlueStar™PCR Master Mix
BSPM-100
100次反应(50μl体积)
2x BlueStar™PCR Master Mix
BSPM-200
1,000次反应(50μl体积)
上海起发实验试剂有限公司是实验试剂一站式采购服务商
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