货号：	ETF1041
供应商：	Enogene
保存条件：	-20度
数量：	大量
规格：	20ul

ER-TrackerRed(内质网红色荧光探针)试剂盒

• 产品简介

   ER-TrackerRed是一种内质网(endoplasmicreticulum,ER)红色荧光探针，可以用于活细胞内质网特异性荧光染色。
  ER-TrackerRed为采用MolecularProbes公司的BODIPYTR进行了荧光标记的glibenclamide，分子量为915.23。Glibenclamide即glyburide，中文名为格列苯脲，是一种2型糖尿病治疗药物，可以结合主要定位在内质网上的sulphonylurea受体。因此荧光标记的glibenclamide就可以用作内质网特异性的荧光探针。
    ER-TrackerRed对于细胞的毒性极低。而传统的DiOC6(3)对ER染色的同时也对细胞有一定的毒性。
   ER-TrackerRed呈红色荧光，检测时的最大激发波长为587nm，最大发射波长为615nm。ER-TrackerRed按照后附的使用说明染色后，用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留。
    提供了ER-TrackerRed稀释液，使ER-TrackerRed的使用更加便捷。
    按照1:1000的比例稀释，可以配制20mlER-TrackerRed工作液；按照1:3000的比例稀释，可以配制60mlER-TrackerRed工作液。
二、试剂盒组份

组份	Cat:ETF1041
ER-TrackerRed(1mM)	20μl
ER-TrackerRed稀释	60ml

三、保存条件：
-20℃保存，半年有效。ER-TrackerRed需-20℃避光保存。

• 注意事项：
  • ER-TrackerRed(1mM)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片
  • 刻至全部融解后使用。对于微量的液体，每次使用前先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。
  • 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  • 需自备盖玻片和载玻片。
  • 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
• 操作步骤：

 1.ER-TrackerRed工作液的配制：

1. 取少量ER-TrackerRed按照1:1000的比例加入到ER-TrackerRed稀释液中。例如取1μl

ER-TrackerRed加入到1mlERTrackerRed稀释液中。混匀后即为ER-TrackerRed工作液。

1.  ER-TrackerRed工作液使用前需37℃预温育。

注：工作液中ER-TrackerRed的浓度可以根据实际情况进行适当调整，推荐的稀释比例调整范围为1:1000-1:3000。为降低背景，在染色效果可以接受的范围内，建议尽量使用较低浓度的ER-TrackerRed。
2.内质网的荧光标记：

1. 去除细胞培养液，用适量的溶液如HBSSwithCa2+&Mg2+(Hanks’BalancedSaltSolutionwithCa2+&Mg2+)洗涤生长在盖玻片上的细胞。对于悬浮细胞的染色可以参考贴壁细胞的染色方法进行。
2. 去除洗涤液，加入步骤1配制好的并37℃预温育的ER-TrackerRed染色工作液，与细胞37℃共孵育15-30分钟。
3. 去除ER-TrackerRed染色工作液，用细胞培养液洗涤细胞1-2次。
4. 随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到内质网呈明亮的强荧光染色。
5. 如需固定，可以使用4%甲醛37℃固定2分钟。固定后用适当的洗涤液洗涤2-3次，每次5分钟，随后可以进行复染或滴加适当的抗荧光淬灭封片液，最后封片观察。注意：ER-TrackerRed染色的细胞不能用TritonX-100通透，TritonX-100通透处理会导致ER-TrackerRed的荧光染色消失。