DualLuciferaseReporterGeneAssayKit

双荧光素酶报告基因检测试剂盒

产品信息

产品描述

萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase）大小为61KDa，单亚基蛋白，能够催化荧光素（luciferin）氧化，生成氧化荧光素oxyluciferin；海参荧光素酶（renillaluciferase）为36KDa的单亚基蛋白，能够催化腔肠素（coelenterazine）氧化形成coelenteramide。二者在翻译后均无需修饰即可发挥作用。

翊圣生物生产的DualLuciferaseReporterGeneAssayKit双荧光素酶报告基因检测试剂盒首先以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶报告基因的活性，之后在淬灭该荧光反应的同时，以腔肠素为底物检测海参荧光素酶报告基因的活性。其检测机理机理如图所示：

萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。

通常将目的基因的5’UTR或者启动子克隆至FireflyLuciferase的上游，或者3’UTR克隆至FireflyLuciferase的下游，通过检测萤火虫荧光素酶的量来检测启动子或者调控原件的转录调控作用。RenillaLuciferase作为内参，来消除细胞数量或者转染效率的差异。

产品组分

运输及保存方式

冰袋运输。

本产品-20℃保存12个月。长期保存推荐-80℃。

萤火虫荧光素酶反应工作液和海肾荧光素酶反应工作液现配现用。

实验步骤

1：裂解细胞

1）将细胞裂解液充分混匀，按如下方式加入细胞裂解液，充分裂解细胞。

a:对于贴壁细胞，吸尽细胞培养液，按照下表比例加入细胞裂解液，轻轻旋转培养皿或者培养板使裂解液完全覆盖细胞，

b:对于悬浮细胞，离心弃去上清，按照下表比例加入裂解液，  

冰上孵育5min，充分裂解细胞。

2）（选作）10000-16000转离心1min，取上清。

2：荧光检测

1）取20μL细胞裂解液，加至黑色酶标板中。按照实验需要，可设置3孔-5孔重复。

2）配置萤火虫荧光素酶反应工作液和海肾荧光素酶反应液，即萤火虫荧光素酶底物（50X）和海肾荧光素酶底物（50X）分别用对应的缓冲液稀释至1X工作液。并孵育至室温。